目的 研究橘红素预处理对过氧化氢(H2O2)诱导的成骨细胞氧化损伤的保护作用和机制.方法 ①酶消化法分离培养大鼠颅骨来源的原代成骨细胞,分别培养7和21 d后,采用碱性磷酸酶(AKP)染色和茜素红染色鉴定细胞.② 橘红素5～40μmol·L-1孵育成骨细胞48 h后,加H2O2300μmol·L-11 h,采用CCK-8法测定细胞存活率,AKP试剂盒测定AKP活性.③培养的成骨细胞分为细胞对照组、模型组(H2O2300μmol·L-1,孵育1 h)、模型+橘红素组(橘红素10μmol·L-1预处理48 h后加H2O2300μmol·L-1,1 h).茜素红染色检测钙化结节数量,流式细胞术检测成骨细胞内活性氧(ROS)水平,超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒检测SOD活性,Western印迹法检测成骨细胞转录因子(OSX)和骨保护素(OPG)蛋白表达水平.结果 ①AKP染色成骨细胞细胞胞质呈蓝色,茜素红染色可见钙化结节,结节呈深红色.②与模型组相比,橘红素(10～30μmol·L-1)预处理组成骨细胞存活率显著升高(P<0.01),橘红素(10～20μmol·L-1)预处理组成骨细胞AKP活性显著增加(P<0.05).③与细胞对照组相比,模型组成骨细胞矿化结节数量显著降低(P<0.05),ROS水平明显升高(P<0.01),SOD活性明显降低(P<0.01),OSX和OPG蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,模型+橘红素10μmol·L-1预处理组矿化结节数量明显增加(P<0.05),ROS水平显著降低(P<0.01),SOD活性显著升高(P<0.01),OSX和OPG的蛋白表达水平显著升高(P<0.05).结论 橘红素可通过激活SOD、减少ROS累积而降低氧化应激,对H2O2诱导的成骨细胞氧化损伤具有保护作用.
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