试验拟通过建立兔源性肺炎克雷伯氏菌的PCR检测方法,为规模化兔场肺炎克雷伯氏菌的检测提供理论依据.以肺炎克雷伯氏菌的保守序列khe基因设计特异性引物,建立PCR反应体系,并对反应条件进行优化.选择不同菌株进行PCR扩增来检测该方法的特异性.接着对不同浓度的肺炎克雷伯氏菌DNA进行PCR扩增,以检测该方法的敏感性.对PCR反应体系和反应条件进行优化,结果显示当引物浓度为50µmol/L,退火温度为52℃时,特异性条带最亮.特异性试验结果显示只有肺炎克雷伯氏菌有特异性条带出现.敏感性试验结果显示建立的PCR检测方法能检测出的DNA最低浓度为1.83 ng/µL.研究所建立的PCR检测方法具有良好的敏感性和特异性,适合肺炎克雷伯氏菌的检测.
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