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稳定表达抗HER2单克隆抗体的FUT8基因敲除细胞株的建立

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本研究在实验室前期构建的敲除α-1,6-岩藻糖基转移酶(FUT8)基因的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞株(FUT8-/-CHO-S)基础上,建立了稳定表达IgG1型抗HER2单克隆抗体的稳转细胞株.以曲妥珠单抗为模式蛋白,构建了带有嘌呤霉素抗性基因的表达载体pIRES-HC和pIRES-LC,并用电穿孔法共转染入FUT8-/--CHO-S细胞,通过嘌呤霉素加压培养、DotBlot和Western Blot等检测方法,经过两轮有限稀释筛选出了高表达的稳转细胞株Tru-FUT8/-CHO-S.该细胞株在批次培养(Batch)中最高生长密度达每毫升6.05×106个,抗体产量为168 mg/L.在补料培养(Fed-Batch)中,通过补料CHOFeed 4的添加,最高生长密度提高到每毫升17.1×106个,抗体产量达到437 mg/L,试验结果表明改造的FUT8-/-CHO-S细胞株具有开发成工业细胞株的潜力.
Establishment of FUT8 Knockout CHO-S Cell Line with Stable Expression of Anti-HER2 Monoclonal Antibody

袁瑗、边延林、张宝红、朱建伟

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上海交通大学药学院,细胞工程及抗体药物教育部工程研究中心,上海 200240

中国仓鼠卵巢(CHO)细胞 稳定转染 细胞株筛选 有限稀释法

2020

中国医药工业杂志
上海医药工业研究院,中国化学制药工业协会

中国医药工业杂志

CSTPCDCSCD北大核心EI
影响因子：0.487
ISSN：1001-8255
年,卷(期)：2020.51(1)
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