摘要
蛋白L(Protein L)是由大消化链球菌(Peptostreptococcus magnus)产生的一种细胞壁表面蛋白,可与带有kappa轻链的抗体特异性结合,是抗体纯化的重要工具之一.目前国内市场在售的Protein L亲和填料种类少、价格昂贵,且在载量与耐碱性能上存在较大的提升空间.该研究采用构建的耐碱突变Protein L表达菌株DMR582,通过高密度发酵、聚乙烯亚胺(PEI)抽提、预处理及阳离子交换柱色谱纯化获得纯度达96.7％的Protein L,并将其固定于环氧活化琼脂糖介质上,制备得Protein L亲和色谱填料.经参数优化,其对抗体片段Fab在10％穿透下的动态结合载量(DBC10％)达到35mg/(mL填料).采用100 mmol/L氢氧化钠溶液模拟50次在位清洗(CIP)后测得其DBC10％为初始值的73.9％,比原始序列配体填料高.在15 mmol/L氢氧化钠溶液模拟100次CIP后其DBC10％仍能保持在初始值的89.6％,与在售产品Capto L填料耐碱性相当.
NETL
NSTL
维普
万方数据