摘要
目的 观察丹参通络解毒汤药物血清对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)自噬及血管生成的影响,探讨其作用机制.方法 建立CMECs缺氧/复氧损伤模型,将CMECs随机分为空白组、模型组、丹参通络解毒汤药物血清组、3-MA自噬抑制剂组,除空白组外其余各组均置于低糖无血清DMEM培养基中培养,同时置于37℃、94％N2、1％O2、5％CO2培养箱中缺氧2h,换正常DMEM培养基,给氧3 h,再给予相应药物干预.倒置显微镜观察CMECs细胞生长及形态,检测试剂盒测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、p62及血管内皮生长因子(VEGF)表达,免疫荧光检测CMECs细胞特征性表面标志物蛋白CD34表达.结果 与空白组比较,模型组CMECs细胞坏死程度增加,培养液中LDH含量明显增加(P＜0.01),Beclin 1、VEGF蛋白表达明显升高(P＜0.01,P＜0.05),p62蛋白表达明显降低(P＜0.01),CD34蛋白红色荧光明显减弱;与模型组比较,丹参通络解毒汤药物血清组和3-MA自噬抑制剂组CMECs细胞坏死程度减轻,培养液中LDH含量明显减少(P＜0.01),Beclin 1蛋白表达明显降低(P＜0.01),p62、VEGF蛋白表达明显升高(P＜0.01,P＜0.05),CD34蛋白红色荧光明显增强.结论 丹参通络解毒汤能适度抑制缺氧/复氧CMECs细胞自噬,从而促进血管生成,达到保护CMECs细胞的目的.
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