摘要
目的 通过构建重组双荧光素酶报告基因质粒Myh6-Luc,筛选诱导小鼠畸胎瘤细胞P19向心肌细胞分化的最佳中药有效成分,并对诱导效果进行验证.方法 将Myh6基因的启动子区域(～1507 bp)插入pGL6报告质粒荧光素酶基因的上游,构建心肌细胞特异启动子荧光素酶报告基因系统.通过阳性药物0.005％二甲基亚砜对该荧光素酶报告基因系统进行验证.通过双荧光素酶检测方法筛选诱导P19细胞向心肌细胞分化的最佳中药有效成分,经心肌细胞标志物心肌肌钙蛋白T (cTnT)免疫荧光染色对该有效成分的诱导作用进行验证,并通过RT-qPCR检测miR-1和miR-25的表达.结果 经双酶切鉴定质粒构建成功,并通过阳性药物诱导证实该系统的有效性.一定浓度的三七皂苷Fe、三七皂苷R1 (NGR1)和人参皂苷Rh1均能对P19细胞产生诱导作用,其中1 μmol/L NGR1诱导效果最明显.1μmol/L NGR1对P19细胞进行诱导后,大部分细胞可表达cTnT,且miR-1表达上调,miR-25表达下调.结论 基于Myh6启动子的药物筛选系统可用于发现诱导干细胞向心肌细胞分化的中药有效成分,1 μmol/L NGR1是诱导P19细胞向心肌细胞分化的有效药物,其机制可能与上调miR-1、下调miR-25的表达有关.
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