摘要
目的 观察肾衰Ⅱ号方对慢性肾衰竭大鼠有氧糖酵解及肾间质纤维化的影响,探讨其抗肾间质纤维化的作用机制.方法 体内实验以5/6(A/I)手术构建慢性肾衰竭大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、中药组、西药组,进行相应干预8周后,取肾组织行PAS染色观察肾脏病理变化,Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达,免疫组化检测α-SMA、己糖激酶(HK)2蛋白定位,紫外法检测肾组织HK活性,比色法检测肾组织乳酸、丙酮酸浓度;体外实验以白细胞介素(IL)-1β刺激大鼠肾成纤维细胞NRK-49F构建NRK-49F增殖活化模型,细胞分为空白组、IL-1β组、IL-1β+肾衰Ⅱ号方低剂量组(200µg/mL)、IL-1β+肾衰Ⅱ号方高剂量组(400µg/mL)、IL-1β+2-脱氧-D-葡萄糖组(10 mmol/L),Western blot检测NRK-49F细胞α-SMA、增殖细胞核抗原(PCNA)、纤维连接蛋白(FN)、HK2蛋白表达,比色法检测细胞培养基乳酸浓度,葡萄糖氧化酶法检测细胞培养基葡萄糖浓度,免疫荧光检测HK2蛋白表达.结果 体内实验:与假手术组比较,模型组PAS染色提示肾间质糖原含量增加,肾小球、肾小管形态异常;α-SMA蛋白表达明显升高(P<0.01),肾组织乳酸浓度、乳酸/丙酮酸、HK活性、HK2蛋白表达均明显升高(P<0.01).与模型组比较,中药组和西药组肾组织病理变化改善,α-SMA蛋白表达、乳酸浓度、乳酸/丙酮酸、HK活性、HK2蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01).体外实验:与空白组比较,IL-1β组NRK-49F细胞FN、α-SMA、PCNA、HK2蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01);细胞培养基pH值、葡萄糖浓度明显降低(P<0.05),乳酸浓度明显升高(P<0.01);与IL-1β组比较,各干预组NRK-49F细胞FN、α-SMA、PCNA、HK2蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01);细胞培养基pH值、葡萄糖浓度升高(P<0.05,P<0.01),乳酸浓度明显降低(P<0.01).结论 肾衰Ⅱ号方可通过抑制NRK-49F细胞有氧糖酵解反应,从而阻止成纤维细胞增殖活化,实现其抗肾间质纤维化的作用.
基金项目
国家自然科学基金(81973770)
上海市进一步加快中医药事业发展三年行动计划(ZY-2018-2020-FWTX-7005)
上海中医药大学"研究生创新培养专项"(Y2020006)
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