摘要
目的梯度高渗法,弱酸洗脱法,43℃加热处理等方法提取小鼠HepA 22肝癌细胞抗原,用以致敏小鼠脾细胞,观察其对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的体外激活效应.方法①梯度高渗法,即2.7%NaCl,1.8%NaCl和蒸馏水3次低温高速离心,收集上清提取.②弱酸洗脱,以pH3.3的枸橼酸-磷酸盐缓冲液室温下处理HepA-22细胞5min,低速离心,收获上清.③43℃加热处理,将HepA-22细胞置于43℃,恒温水浴16h.④用提取的抗原致敏小鼠脾细胞,MTT法检测其体外CTL杀伤活性.结果①相同抗原浓度,不同条件或不同提取方法所获得的抗原对小鼠脾细胞CTL杀伤能力的激活作用不相同.②经过43℃处理后提取的抗原比未经加热处理提取的抗原作用大.③弱酸洗脱提取的膜抗原作用最明显.④去掉膜抗原后再提取的蛋白激活作用最小.⑤同种提取方法不同浓度抗原作用不同,随着浓度增高,CTL活性增强.结论①43℃加热处理可以诱导HepA-22细胞产生HSP-抗原肽复合物,增加其对小鼠CTL活性激活作用.②弱酸可以洗脱肿瘤细胞表面的Ⅰ类抗原肽,该多肽致敏的小鼠脾细胞可以有效地诱导特异性抗肿瘤免疫功能.
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