摘要
目的 探究LncRNA NEAT1对骨肉瘤细胞的调控机制.方法 采用qRT-PCR检测正常人成骨细胞和骨肉瘤细胞中LncRNA NEAT1的差异表达,构建siRNA-NEAT1#1、siRNA-NEAT1#2、siR-NA-NEAT1#3转染至骨肉瘤细胞并验证其转染效率.通过CCK-8法、流式细胞术、Transwell实验分别检测细胞活力、凋亡、迁移和侵袭能力.使用核质分离实验验证NEAT1定位.利用生物信息学预测网站预测LncRNA NEAT1的靶基因,继而采取双荧光素酶精准靶点验证实验.miR-185-5p inhibitor和siRNA-NEAT1共同转染至骨肉瘤细胞中验证LncRNA NEAT1通过海绵结合靶基因miR-185-5p对骨肉瘤细胞生物学行为进行调控.结果 LncRNA NEAT1在骨肉瘤组织及细胞中高表达,在骨肉瘤细胞中敲低LncRNA NEAT1表达抑制细胞活力、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,LncRNA NEAT1竞争性结合miR-185-5p,同时敲低骨肉瘤细胞LncRNA NEAT1与miR-185-5p的表达部分逆转了以上细胞行为.结论 敲低miR-185-5p的表达水平可部分逆转siRNA-NEAT1对骨肉瘤细胞活力的抑制作用.
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