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皱皮木瓜中CsFPS基因的克隆及原核表达分析

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目的 对皱皮木瓜三萜生物合成途径中法尼基焦磷酸合酶基因进行克隆及生物信息学、 原核表达分析,并考察其在皱皮木瓜果实中的表达规律.方法 通过RT-PCR法进行扩增,从皱皮木瓜果实中克隆获得CsFPS1、CsFPS2基因.采用生物信息学软件预测编码蛋白的特征,通过DNAman和Mega 6软件进行同源氨基酸比对和系统进化树的绘制,构建原核表达载体并转化至大肠杆菌中诱导表达,通过qRT-PCR法分析基因表达模式.结果 CsFPS1、CsFPS2基因的ORF长度分别为1182、1029 bp,分别编码393、342个氨基酸.两者均为稳定的酸性蛋白,无跨膜结构,二级结构显示其均由α-螺旋结构占主导.皱皮木瓜的CsFPS1蛋白与苹果的FPS蛋白单独聚成一支,CsFPS2蛋白与黄龙胆的FPS蛋白亲缘关系较高.荧光定量分析结果表明,2条CsFPS基因的表达都随果实发育而呈下降趋势,CsFPS1基因具有更高表达.重组蛋白pET-28a-CsFPS1经SDS-PAGE电泳分析,在42 kDa处出现蛋白条带.结论 本研究首次从皱皮木瓜中克隆CsFPS1、CsFPS2基因,成功构建CsFPS1重组蛋白的大肠杆菌原核表达体系,为皱皮木瓜三萜生物合成途径中FPS基因的功能验证奠定基础.

方清影、肖波、吴君贤、徐睿、方艳、邓斌、胡朝玉、查良平

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安徽中医药大学,安徽 合肥230012

中药研究与开发安徽省重点实验室,安徽 合肥230012

皱皮木瓜 CsFPS 法尼基焦磷酸合酶 基因克隆 原核表达

国家自然科学基金中药研究与开发安徽省重点实验室开放基金

82073957AKLPDCM202001

2023

10.3969/j.issn.1001-1528.2023.01.059

中成药
国家食品药品监督管理局,信息中心中成药信息站,上海中药行业协会

中成药

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.217
ISSN：1001-1528
年,卷(期)：2023.45(1)
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