摘要
目的 基于P38 MAPK/ERK通路探讨五眼果水提物抑制一水合草酸钙(COM)晶体致HKC细胞损伤的作用机制.方法 将HKC细胞分为正常组、模型组和五眼果水提物高、中、低剂量组(160、80、40 μg/mL),除正常组外其余各组用 100 μg/mL COM晶体构建HKC细胞损伤模型,药物组同时给予相应质量浓度药物.采用MTT法检测细胞存活率,微板法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性和粘附在细胞表面钙离子(Ca2+)水平,自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)结合激光共聚焦显微镜检测自噬流,Western blot 法检测细胞 LC3B、Beclin1、P62、mTOR、p-mTOR、ERK1/2、p-ERK1/2、P38 和p-P38 蛋白表达.结果 与模型组比较,五眼果水提物组细胞存活率升高(P＜0.05),细胞上清液LDH活性和粘附在细胞表面Ca2+水平降低(P＜0.05),细胞自噬体和自噬溶酶体形成减少(P＜0.05),p-ERK1/2/ERK1/2、LC3BⅡ/LC3BⅠ和 Beclin-1 蛋白表达降低(P＜0.05),P62、p-P38/P38 和 p-mTOR/mTOR蛋白表达无明显变化(P＞0.05).结论 五眼果水提物通过调控 P38 MAPK/ERK信号通路抑制自噬,降低COM晶体与细胞的黏附性,从而减轻草酸钙晶体对肾小管上皮细胞的损伤.
维普
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