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补肾调肝周期疗法及组方含药血清对Ishikawa细胞miR-140-5p/VEGF信号通路的影响

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目的 研究补肾调肝周期疗法及组方对Ishikawa细胞增殖、分泌及miR-140-5p/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路的影响.方法 制备各组含药血清及空白血清,运用慢病毒转染构建miR-140-5P稳定过表达的Ishikawa细胞株,将细胞分为阴性对照组(转染miR-140-5p NC+空白血清)、过表达组(转染miR-140-5p siRNA+空白血清)、阳性对照组(转染miR-140-5p siRNA+阿司匹林含药血清)、逍遥散组(转染miR-140-5p siRNA+逍遥散含药血清)、三子养膜汤组(转染miR-140-5p siRNA+三子养膜汤含药血清)、补肾调肝周期疗法组(转染miR-140-5p siRNA+周期疗法含药血清).倒置荧光显微镜观察转染效率;ELISA法检测细胞培养液上清E2、P水平;流式细胞仪测定细胞周期分布;CCK-8法检测细胞增殖效率;Western blot法检测细胞VEGF、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)蛋白表达;RT-qPCR法检测细胞miR-140-5p、VEGF、ER、PR mRNA表达.结果 成功构建miR-140-5p稳定过表达的Ishikawa细胞系.miR-140-5p过表达会抑制 Ishikawa 细胞 E2、P 的分泌(P＜0.01),使 Ishikawa 细胞发生 G2/M 期阻滞(P＜0.01),抑制Ishikawa细胞的增殖(P＜0.01)和VEGF、ER、PR mRNA表达(P＜0.01);而各组含药血清均能降低Ishikawa细胞miR-140-5p表达(P＜0.01),促进E2、P 的分泌(P＜0.01),使细胞周期基本恢复正常(P＜0.05,P＜0.01),促进细胞增殖(P＜0.01),升高VEGF mRNA表达(P＜0.01);阿司匹林、逍遥散、三子养膜汤含药血清均能升高ER、PR mRNA 表达(P＜0.05,P＜0.01);补肾调肝周期疗法含药血清能升高 ER mRNA 表达(P＜0.01).结论 miR-140-5p过表达会损伤子宫内膜容受性,可能是子宫内膜容受性的关键调控因子,补肾调肝周期疗法及组方可能通过介导miR-140-5p/VEGF,靶向上调VEGF、ER、PR基因的表达,从而促进子宫内膜细胞增殖、改善子宫内膜细胞内分泌及局部血运以提升子宫内膜容受性.

王茜、何忆清、刘泉、张颖、杨硕

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湖南中医药大学,湖南 长沙 410208

补肾调肝周期疗法 逍遥散组 三子养膜汤组 子宫内膜容受性 miR-140-5p/VEGF Ishikawa细胞

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2024

10.3969/j.issn.1001-1528.2024.08.044

中成药
国家食品药品监督管理局,信息中心中成药信息站,上海中药行业协会

中成药

CSTPCD北大核心
影响因子：1.217
ISSN：1001-1528
年,卷(期)：2024.46(8)
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