目的 通过网络药理学结合细胞实验验证探讨姜黄素对槟榔碱诱导的HaCaT细胞焦亡和纤维化的影响.方法 通过TCMSP数据库获得姜黄素靶点,PubChem数据库获取姜黄素3D结构,导入PharmMapper进行药物靶点预测;NCBI数据库得到口腔黏膜下纤维化靶点,得到共有靶点,绘制韦恩图.通过STRING数据库构建PPI网络,Cytoscape 3.9.1软件构建网络模型,DAVID平台进行GO功能和KEGG通路富集分析,AutoDock软件进行分子对接,PyMol软件可视化处理.通过槟榔碱构建口腔黏膜下纤维化HaCaT细胞,并采用siCav-1进行干预,考察姜黄素对口腔黏膜下纤维化及其关键通路和靶点表达的影响.结果 共获得22个姜黄素和口腔黏膜下纤维化共有靶点.PPI网络筛选得到1个关键子网络.GO富集分析发现,姜黄素干预口腔黏膜下纤维化与Cav-1等多种生物功能相关.KEGG结果显示,细胞焦亡密切相关的NOD样受体信号通路与PPI网络中的关键子网络之一紧密联系.实验表明,姜黄素能降低HaCaT细胞LDH、IL-1β、IL-18、ROS水平(P<0.05,P<0.01);姜黄素可降低HaCaT细胞Collagen-Ⅰ、Cav-1、NLRP3、caspase-1、GSDMD-N、IL-18、IL-1β蛋白表达(P<0.05,P<0.01);进一步研究发现,敲低HaCaT细胞Cav-1后细胞焦亡和纤维化均被抑制,且姜黄素和siCav-1同时干预与单独干预比较上述蛋白表达无明显变化(P>0.05).结论 姜黄素可通过调控Cav-1抑制槟榔碱诱导的HaCaT细胞焦亡和纤维化进程,该机制可能参与其减轻槟榔碱诱导的口腔黏膜下纤维化,具体机制有待后续进一步研究.
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