[目的]探究槲皮素(quercetin,Q)对多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制.[方法]建立PCOS大鼠模型,提取培养卵巢颗粒细胞进行鉴定,并分为PCOS组、PCOS+4-氯-N-环己基-N-(苯基甲基)苯甲酰胺(N-benzyl-4-chloro-N-cyclohexylbenzamide,FZ)组、PCOS+L-Q(槲皮素0.5μg·mL-1)组、PCOS+H-Q(槲皮素1μg·mL-1)组、PCOS+H-Q+FZ组、PCOS+盐酸二甲双胍(metformin hydrochloride,MH)组,并取正常颗粒细胞作为对照组.以四甲基偶氮唑盐[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT]法检测细胞活力,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞上清液中雌二醇(estradiol,E2)、孕酮(progesterone,P)、促卵泡生成素(follicle-stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、雄激素(testosterone,T)含量,流式细胞术测定细胞凋亡率,并进行活性氧(reactive oxygen species,ROS)活性检测.实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)检测细胞中晚期糖基化终末产物受体(receptor of advanced glycation end products,RAGE)、Bax、Bcl-2及炎性介质高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)的mRNA表达情况,免疫印迹法检测细胞中晚期糖基化终末产物/晚期糖基化终末产物受体(advanced glycation end products/receptor of advanced glycation end products,AGEs/RAGE)及细胞外信号调节蛋白激酶/有丝分裂原蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase/mitogen-activated protein kinase,ERK/MAPK)相关蛋白表达情况.[结果]分离的大鼠卵巢颗粒细胞鉴定正常.MTT结果显示,槲皮素在0～1μg·mL-1时对正常颗粒细胞活力无影响,对于PCOS组细胞,槲皮素作用后各组细胞活力显著升高(P<0.05,P<0.01).与PCOS组比较,PCOS+FZ组、PCOS+H-Q组、PCOS+H-Q+FZ组和PCOS+MH组细胞中E2、LH、T含量以及ROS活性均显著降低(P<0.05,P<0.01),PCOS+H-Q组、PCOS+H-Q+FZ组、PCOS+MH组中RAGE、HMGB1、Bax的mRNA,AGEs和RAGE的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05,P<0.01),Bcl-2的mRNA及p-ERK、p-p38 MAPK蛋白表达水平均显著升高(P<0.05,P<0.01).[结论]槲皮素能够通过降低AGEs/RAGE通路活性,促进PCOS大鼠卵巢颗粒的增殖,抑制细胞凋亡来改善PCOS.
Effect of Quercetin on Proliferation and Apoptosis of Ovarian Granulosa Cells in Rats with Polycystic Ovarian Syndrome
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