[目的]通过体内外实验探究野马追内酯O(eupalinolide O,EO)对人乳腺癌BT-20细胞的作用及机制.[方法]采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法测定EO对BT-20细胞的抑制作用及半数抑制浓度,以确定EO浓度.将BT-20细胞分为空白对照组、EO 5 μmol·L-1组、EO 10 μmol·L-1组,后两组以EO处理24 h,采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法检测细胞毒性;流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况.24只裸鼠通过乳腺脂肪垫注射BT-20细胞,建立乳腺癌模型,并随机分为对照组、阿霉素组(7 mg·kg-1),EO低剂量组(15 mg·kg-1)和EO高剂量组(30 mg·kg-1),每组6只.除对照组外,各组裸鼠连续腹腔注射对应药物治疗21 d,期间测量体表肿瘤体积;结束后称取肿瘤质量,并采用免疫组化染色检测肿瘤组织中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和Ki-67表达.采用免疫印迹法检测细胞和裸鼠肿瘤组织中B细胞淋巴瘤-2(B-celllymphoma-2,Bel-2)、Bcl-2关联X(Bcl-2 associated X protein,Bax)、聚 ADP 核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-3,cleaved caspase-3)和活化的半胱氨酸蛋白酶-9(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-9,cleaved caspase-9)蛋白表达.[结果]EO对BT-20细胞的抑制作用具有剂量-时间依赖性.与空白对照组比较,EO 5、10 μmol·L-1组细胞毒性和凋亡率增加(P＜0.05,P＜0.01),且EO 10 μmol·L-1组的细胞周期明显阻滞于G2/M期(P＜0.01).与对照组比较,阿霉素组、EO低剂量组、EO高剂量组的裸鼠肿瘤质量显著降低(P＜0.01,P＜0.05),肿瘤组织内PCNA和Ki-67抗原表达显著降低(P＜0.01),肿瘤体积随治疗进展显著缩小(P＜0.01,P＜0.05).与空白对照组比较,各组细胞的Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.01,P＜0.05),Bax、PARP、cleaved caspase-3及cleaved caspase-9蛋白表达升高(P＜0.01,P＜0.05);与对照组裸鼠比较,各给药组的Bcl-2蛋白表达降低(P＜0.01,P＜0.05),Bax、PARP、cleaved caspase-3 及 cleaved caspase-9 蛋白表达升高(P＜0.01,P＜0.05).[结论]EO 在体内外抑制 BT-20 细胞增殖并诱导细胞凋亡,作用机制可能与其抑制Bcl-2蛋白表达,促进Bax、PARP、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白表达有关.
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