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密码子优化的H5亚型流感病毒HA基因重组质粒在哺乳动物细胞中的高效表达及其免疫原性的研究

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为了提高流感病毒血凝素(HA)基因的表达量及其免疫原性,按照哺乳动物偏爱密码子将A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)流感病毒的血凝素基因进行优化改造,然后插入到真核表达载体pCI-neo中,构建了真核表达质粒pCI-opti-HA.将此质粒和含野生HA基因的真核表达质粒pCI-wt-HA分别转染Vero或293T细胞,通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和蛋白免疫印迹(WB)实验比较HA蛋白的表达量.将两种重组质粒免疫Balb/c小鼠,比较两者诱导的抗体产生水平.三次免疫后两周用强毒攻击,通过体温和体重变化评价两种重组质粒的免疫保护效果.IP-MA和WB实验结果表明:密码子优化后,HA蛋白在哺乳动物细胞中的表达水平显著提高.酶联免疫吸附实验(ELISA)结果表明:小鼠免疫后密码子优化的重组质粒诱导的特异性抗体效价较高.攻毒试验结果表明:两种重组质粒均能够提供较好的保护.

刘春国、刘明、孙恩成、李洪涛、杜金玲、张新涛、石薇琳、谢金鑫、刘大飞

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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,农业部动物流感重点开放实验室及国家禽流感参考实验室,哈尔滨,150001

黑龙江八一农垦大学动物科技学院,大庆,163319

H5亚型 流感病毒 HA 密码子优化 DNA疫苗 免疫效果

国家科技支撑计划黑龙江省自然科学基金

2006BAD06A05ZJN-0702-02

2009

自然科学进展
国家自然科学基金委员会 中国科学院

自然科学进展

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.843
ISSN：1002-008X
年,卷(期)：2009.19(8)
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