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甘蔗线条花叶病毒P1蛋白基因原核表达及抗血清制备

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甘蔗线条花叶病毒Sugarcane streak mosaic virus(SCSMV)是引起甘蔗花叶病的主要病原之一,在世界各大蔗区普遍发生,严重威胁甘蔗产业的发展.建立快速有效的检测方法对于SCSMV的防控有着重要意义.本研究依据SCSMV P1基因序列合成一对引物,扩增获得1 074 bp的目的基因,将目的基因与原核表达载体pET28a连接,获得pET28a-P1SCSWV.将连接正确的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta菌株,经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳检测显示在分子量约为42 kDa处有目的蛋白带,与预期的SCSMV P1大小一致.融合蛋白主要是以可溶性蛋白的形式存在.利用镍柱亲和纯化重组的SCSMV P1蛋白,并免疫健康新西兰大白兔,制备兔抗血清.Western blot分析显示,在对多个样品进行检测时制备的抗血清能特异性地识别SCSMV的P1蛋白,在受SCSMV侵染的甘蔗植株中能检测到P1蛋白的表达,而在健康植株中检测不到P1蛋白的表达.制备的抗血清稀释至1∶20 000时仍能特异地检测到目的蛋白条带,说明通过大肠杆菌表达P1制备的SCSMV抗血清特异性强,效价高.本研究为SCSMV的快速检测提供了有效方法.
Prokaryotic expression of Sugarcane streak mosaic virus P1 protein gene and preparation of antiserum

徐小伟、陈雯、丁诗文、甘海锋、张坤、贺振

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扬州大学园艺与植物保护学院,扬州 225009

甘蔗线条花叶病毒 P1蛋白 原核表达 抗血清

江苏省自然科学基金中央本级重大增减支项目扬州大学青蓝工程项目

BK202113232060302

2022

10.16688/j.zwbh.2021042

植物保护
中国植物保护学会 中国农业科学院植物保护研究所

植物保护

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.004
ISSN：0529-1542
年,卷(期)：2022.48(2)
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