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灰飞虱VAP-B蛋白的抗体制备及体内外应用

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灰飞虱Laodelphax striatellus的囊泡相关膜蛋白相关蛋白B(VAP-B)是内质网膜蛋白家族的蛋白,其主要参与调节囊泡运输、脂类的转运代谢以及未折叠蛋白应答等.本研究克隆了灰飞虱VAP-B基因,构建了 pCold-SUMO-VAP-B原核表达载体,再将其转化大肠杆菌感受态细胞Rosetta(DE3),经过IPTG低温诱导表达得到了含有HIS和SUMO标签的VAP-B可溶性蛋白,经过Ni2+-NTA亲和层析柱纯化后的蛋白再利用rTEV酶去除SU-MO标签,得到无标签的VAP-B蛋白.通过免疫新西兰雄兔制备了 VAP-B的多克隆抗体.Western blot检测结果表明该抗体可以特异性检测到灰飞虱的VAP-B蛋白;同时利用该抗体进行免疫荧光标记,发现其能特异性定位灰飞虱唾液腺内的VAP-B蛋白.研究结果表明制备的VAP-B抗体能够成功用于该蛋白的体内外检测,为阐明VAP-B在灰飞虱体内的关键作用奠定了基础.
Antibody preparation of VAP-B protein from Laodelphax striatellus and application in vivo and vitro

赵霞、秦发亮、刘文文、王锡锋

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中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室,北京 100193

灰飞虱 囊泡相关膜蛋白相关蛋白B 抗体制备 Western blot 免疫荧光标记

国家自然科学基金

31772134

2022

10.16688/j.zwbh.2021246

植物保护
中国植物保护学会 中国农业科学院植物保护研究所

植物保护

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.004
ISSN：0529-1542
年,卷(期)：2022.48(4)
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