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向日葵黑茎病菌RPA/CRISPR-Cas12a快速检测方法的建立

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向日葵黑茎病菌是向日葵上的一种毁灭性真菌,是我国的植物检疫性有害生物.为了准确快速检测向日葵黑茎病菌,本研究根据向日葵黑茎病菌及其近似种的ITS序列差异,设计特异性RPA引物和CRISPR-Cas12a crRNA,建立了 RPA等温扩增技术结合CRISPR-Cas12a检测的快速检测方法.通过条件优化,RPA/CRISPR-Cas12a检测体系在37℃恒温条件下,RPA反应30 min,CRISPR/Cas12a反应20 min,即可特异性检测向日葵黑茎病菌.荧光法检测灵敏度与实时荧光PCR的灵敏度相当,最低检测量为0.1 pg,试纸条法检测最低检测量为1 pg.由于试纸条检测结果可用肉眼观察,快速便携,操作简单,更适合用于田间和口岸的向日葵黑茎病菌快速早期检测;而荧光检测灵敏度高,对环境要求高,更适合用于实验室检测.
Establishment of RPA/CRISPR-Cas12a rapid detection for Leptosphaeria lindquistii

邝瑞瑞、雷荣、江丽、段维军、李雪莲、符娜、范在丰、李远、吴品珊

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中国检验检疫科学研究院,北京 100176

中国农业大学植物保护学院,北京 100093

宁波检验检疫科学技术研究院,宁波 315012

伊犁师范大学,伊犁 835000

重庆医科大学永川附属医院,重庆 402177

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向日葵黑茎病菌 RPA CRISPR-Cas12a 荧光检测 侧向流层析试纸条

国家重点研发计划国家重点研发计划中国检验检疫科学研究院基本科研业务费专项

2021YFC26004002021YFC26004022020JK048

2022

10.16688/j.zwbh.2022401

植物保护
中国植物保护学会 中国农业科学院植物保护研究所

植物保护

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.004
ISSN：0529-1542
年,卷(期)：2022.48(6)
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