甘薯潜隐病毒莲藕分离物辅助成分蛋白酶基因原核表达及抗血清制备

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万方数据

中文摘要：根据已报道的甘薯潜隐病毒莲藕分离物sweet potato latent virus-lotus(SPLV-lotus)核苷酸序列设计引物,采用RT-PCR从感病莲藕样品中扩增获得SPLV-lotus辅助成分-蛋白酶基因(HC-Pro),大小为1 375 bp.通过序列测定和分析后,将其克隆到原核表达载体pGEX4T-1,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导并纯化获得大小为74 kD的融合蛋白pGEX4T-1-HC-ProSPLV-lotus.SDS-PAGE结果显示,融合蛋白获得过量表达.以纯化蛋白为抗原免疫新西兰大白兔制备抗血清,采用ELISA和Western blot对抗血清效价和特异性进行检测,当HC-Pro抗血清稀释比为1 ∶256 000时,ELISA显色后()D450读数仍高于0.6,表明所制备抗血清合格;Western blot结果显示,在感染SPLV-lotus植株样品中仍能检测到单一目的条带.这些结果表明,制备的抗血清效价合格且可用于SPLV-lotus的特异性检测.

外文标题：Prokaryotic expression of sweet potato latent virus-lotus helper-component proteinase and antiserum preparation

作者：

王凌琪、董婷婷、陈雯、甘海锋、徐小伟、秦朗、李良俊、贺振

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作者单位：

扬州大学园艺与植物保护学院,扬州 225009

关键词：

甘薯潜隐病毒莲藕分离物辅助成分-蛋白酶原核表达抗血清

基金：

江苏省自然科学基金中央本级重大增减支项目国家特色蔬菜产业技术体系建设项目

项目编号：

BK202113232060302CARS-24-B-03

出版年：

2022

DOI：

10.16688/j.zwbh.2021516

植物保护

中国植物保护学会中国农业科学院植物保护研究所

植物保护

CSTPCDCSCD北大核心

影响因子：1.004

ISSN：0529-1542

年,卷(期)：2022.48(6)

参考文献量6