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木麻黄SSR-PCR反应体系的建立与优化

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为得到木麻黄SSR-PCR反应的最佳体系,以4个种(短枝木麻黄、山地木麻黄、粗枝木麻黄、细枝木麻黄)的24个无性系为材料,采用L16(45)正交设计对影响木麻黄SSR-PCR反应的4个因素(Taq酶、dNTP、Mg2+和引物)在4个水平上进行了优化,并利用直观分析和方差分析两种方法对PCR结果进行评价.结果表明:引物、Mg2+和dNTP均对木麻黄SSR-PCR反应结果有极显著的影响(P<0.01),影响程度由大到小为:引物>Mg2+>dNTP,而Taq酶对扩增结果无显著影响;确定了两种木麻黄SSR-PCR反应体系(体系6和体系15),体系6为1×PCR buffer、2ng模板DNA、0.5μmol·L-1引物、1.5 mmol·L-1 Mg2+、0.1 mmol·L-1 dNTP、0.5 U Taq酶;体系15为1×PCR buffer、2ng模板DNA、0.5μmol·L-1引物、1.75 mmol·L-1 Mg2+、0.2 mmol·L-1 dNTP、1.25 U Taq酶,反应体系共10μL,不足部分用ddH2O补足.从节约成本和降低非特异性产物的角度考虑可将体系6作为最佳体系,体系15为备用体系;本试验所选荧光引物M26、M36的退火温度在52～62℃均可扩增出清晰明亮的条带.为简化操作步骤和减少非特异性产物,可选择60℃作为引物M26、M36的最佳退火温度.
Establishment and Optimization of SSR-PCR Reaction System for Casuarina

李振、仲崇禄、张勇、魏永成、孟景祥

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中国林业科学研究院热带林业研究所,广州 510520

南京林业大学,南京 210037

木麻黄 SSR-PCR反应体系 正交设计

CAFYBB2018ZB00331770716

2021

10.7525/j.issn.1673-5102.2021.02.019

植物研究
东北林业大学

植物研究

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.877
ISSN：1673-5102
年,卷(期)：2021.41(2)
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