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基于CRISPR/Cas9的拟南芥CKX3基因编辑载体构建及转化研究

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细胞分裂素(cytokinin,CK)是参与植物生长发育过程中的关键激素,在植物生长、发育过程起着非常重要作用.细胞分裂素氧化酶/脱氢酶(cytokinin oxidase/dehydrogenase,CKX)是一种不可逆降解细胞分裂素为腺嘌呤/腺苷的黄素酶,作为细胞分裂素信号中降解分支的关键酶,对于维持植物体内的细胞分裂素平衡有着重要作用,有效的控制了植物内源细胞分裂素的水平.选取拟南芥CKX3为目标基因,通过含有拟南芥种皮重组启动子与荧光筛选标记基因mCherry的CRISPR/Cas9载体,来进行高效的拟南芥CKX3基因编辑载体构建并转化拟南芥.利用倒置荧光显微镜筛选具有红色荧光的T0代种子并种植培养获得T1代植株.提取T1代植株基因组进行PCR鉴定和测序分析,鉴定纯合突变后代的性状表型及激素测定.结果 表明,本实验成功构建了编辑载体pHEE401E-mCherry-CKX3,拟南芥转化后代中目标基因成功被高效编辑,CKX3的纯合突变植株表型与野生型差异明显,内源激素含量差异达到显著水平.为研究CKX基因功能奠定了基础.
Construction and Transformation of Arabidopsis CKX3 Gene Editing Vector Based on CRISPR/Cas9

王泽琛、肖荣、欧阳乐军、李莉梅、梁楚炎、潘璟茵、刘智超

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喀什大学生命与地理科学学院,叶尔羌绿洲生态与生物资源研究高校重点实验室,喀什844000

广东石油化工学院生物与食品工程学院,茂名525000

细胞分裂素 氧化酶 脱氢酶 基因编辑 mCherry CRISPR/Cas9

国家自然科学基金广东省自然科学基金广东科技计划大专项广东省教育厅重点项目

320717802019A1515010709mmkj20200352018KZDXM047

2021

10.7525/j.issn.1673-5102.2021.06.020

植物研究
东北林业大学

植物研究

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.877
ISSN：1673-5102
年,卷(期)：2021.41(6)
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