摘要
目的:观察Wnt/GSK3β/β-catenin信号通路各位点在PC12细胞糖氧剥夺再灌注过程中的变化,探索Wnt/GSK3β/β-catenin是否参与PC12细胞糖氧剥夺后自噬及凋亡过程.方法:将培养至成熟后的PC12细胞糖氧剥夺1、2、3H(OGD1、2、3H)后给予再灌注2、4、8、12小时(R2H、R4H、R8H、R12H).CCK-8方法检测不同时限糖氧剥夺组再灌注组各时间点PC12细胞增殖率.确定OGD2H组PC12细胞作进一步实验,以免疫印迹方法(westernblot)检测OGD2H组再灌注各时间点Wnt、GSK3β、β-catenin蛋白以及自噬标志蛋白LC3Ⅱ的表达变化;同时用流式细胞仪测试灌注不同时间点早中晚PC12细胞凋亡率.结果:1)随着OGD时间延长,PC12细胞的增殖率逐渐降低;不同OGD组于再灌注4H内均处于平台期,而R4H后,细胞活性明显降低.2)Wnt、GSK3β、β-catenin蛋白在OGD2H组PC12细胞再灌注0-4H平行降低,在R4-8H表达逐渐增加;而自噬标志蛋白LC3Ⅱ表达趋势与Wnt、GSK3β、β-catenin蛋白相反,于再灌注0-4H逐渐上调,R4-8H表达减弱.3)流式细胞仪检测R4-8H凋亡早中晚期逐渐增多(P<0.05).结论:在PC12细胞糖氧剥夺再灌注过程中,Wnt/GSK3β/β-catenin信号通路的激活与细胞凋亡正相关,与细胞自噬活动负相关.提示抑制Wnt/GSK3β/β-catenin信号通路的表达可能对缺氧神经元再灌注后的神经元有保护作用.
基金项目
1)教育厅-四川省医事卫生法治中心课题:(YF18-Y26)
2)四川省教育厅项目:(17ZB0470)
3)四川省卫计委重点项目:(15018)
4)西南医科大学研究生教育教学改革研究重点课题:(编号2015-04)
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