摘要
目的:通过体外实验观察莫诺苷对 1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma cells,PC)12 模型的保护作用,阐释其通过激活核因子 E-2 相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/抗氧化反应原件(antioxidant response element,ARE)通路抑制铁死亡的作用机制.方法:将细胞分为空白对照组、模型组(1 mmol/L MPP+)、莫诺苷组(5 μmol/L 莫诺苷+1 mmol/L MPP+)、ML385(Nrf2 抑制剂)组(1 mmol/L MPP++2 μmol/L ML385)、莫诺苷+ML385 组(5 μmol/L莫诺苷+1 mmol/L MPP++2 μmol/L ML385).CCK-8 法检测细胞活力,透射电镜观察细胞超微结构,流式细胞术检测活性氧簇(reac-tive oxygen species,ROS),酶联免疫吸附法检测铁(ferrum,Fe)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathi-one,GSH)水平,Western Blot法检测 Nrf2、血红素加氧酶 1(heme oxygenase 1,HO-1)、谷胱甘肽过氧化物酶 4(gluta-thione peroxidase 4,GPX4)、溶质载体家族 7 成员 11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、铁蛋白重链 1(fer-ritin heavy chain 1,FTH1)、膜铁转运蛋白 1(ferroportin 1,FPN1)、酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应检测SLC7A11、GPX4 mRNA表达.结果:在 1 mmol/L MPP+作用PC12 细胞 24 h后,细胞活性降低为空白对照组的 52.75%,5 μmol/L的莫诺苷处理细胞时保护作用最强.透射电镜下见MPP+模型组线粒体大量固缩,嵴间缝隙增宽,膜密度明显增高;与空白对照组相比,模型组 Fe、MDA、ROS 含量明显增多,Nrf2、HO-1、SLC7A11、GPX4、FTH1、FPN1 蛋白表达降低,SLC7A11、GPX4 mRNA 及 GSH 水平降低.莫诺苷能改善 MPP+诱导的 PC12 细胞模型铁死亡的形态变化,促进 Nrf2、HO-1、SLC7A11、GPX4、FTH1、FPN1 蛋白表达,促进 SLC7A11、GPX4 mRNA表达,升高 GSH水平,降低 Fe、ROS、MDA水平.而这一作用可以被 Nrf2 抑制剂 ML385 减弱.结论:莫诺苷在 MPP+诱导的 PC12 细胞帕金森病体外模型中起到神经元保护作用,可能与激活 Nrf2/ARE 信号通路抑制铁死亡有关.
基金项目
中国民族医药学会科研项目(2022Z1116-570211)
河南中医药大学第一附属医院博士科研启动基金(2022BSJJ2015)
河南省博士后科研项目(HN2022071)
河南省卫生健康委国家中医传承创新中心科研专项(2023ZXZX1142)
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