为研究黄瓜单性结实形成的分子调控机制,以黄瓜单性结实自交系'EC1'为材料,分别取开花前1d至开花后4d的子房,提取RNA后等量混合,采用SMART方法构建酵母双杂cDNA文库.结果表明,构建的文库总克隆数为1.16×107CFU,平均插入片段长度≥1000bp,阳性率为100％,符合建库的标准,可用于后续的酵母双杂交筛选.以黄瓜单性结实关键调控因子CsCML25为诱饵,构建pGBKT7-CML25诱饵蛋白表达载体,经自激活活性分析及不同浓度3AT对诱饵蛋白自激活活性抑制效果分析,使用SD-TLH+20 mM 3AT平板可完全抑制诱饵蛋白自激活活性.利用酵母双杂交筛选构建的黄瓜单性结实果实cDNA文库,得到96个初始阳性克隆.利用DNA测序、BLAST分析以及酵母回转验证等方法,最终获得27个可能与CsCML25相互作用的候选蛋白,为从分子水平探究CsCML25调控黄瓜单性结实的机制提供了理论基础.
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