摘要
非洲猪瘟给我国家猪养殖业带来了严重的经济损失，但目前仍无安全、有效的疫苗问世，因此迫切需要研制安全、有效的疫苗。基因缺失苗是短期内较有希望的ASF疫苗。本研究基于ASFV基因II型流行毒株CADC_HN09株，构建了3株非洲猪瘟双基因缺失候选毒株，优选其中1株作为候选疫苗毒株。筛选了5个ASFV复制与组装关键基因，构建了互补基因X的猪原代巨噬细胞；采用同源重组获得4种含有X基因缺失的非洲猪瘟重组混合毒，已空斑纯化至F1、F2和F4代。完成了佐剂增强型非洲猪瘟基因缺失疫苗（候选疫苗）104TCID50、103TCID50、102TCID50剂量进行单次免疫安全性评价。各免疫试验组仔猪体温均未超40.5℃，临床表现正常，免疫后17天，所有试验仔猪口、鼻、肛拭子、血清和组织样品，病毒核酸检测均为阴性，无明显病理损伤。进行了怀孕中期母猪安全性评价，免疫组体温均未超过39℃，未发生流产，临床表现正常。已有6头免疫母猪分娩，产仔数、存活数均正常。完成了一免疫后48天、二免后40天及78天，肌注102HAD50的ASFV强毒，免疫组攻毒后28天全部存活，保护率均为100%。获得了2株原代巨噬细胞永生化，传至33代和24代，保持原代骨髓巨噬细胞的形态特征，能够稳定传代、增殖、冻存与复苏。研制了ASFV P72阻断ELISA抗体检测试剂盒、间接ELISA抗体检测试剂盒及非洲猪瘟CD2v试剂盒等，正准备申报生产批准文号。研制了纳米微球长效CpG佐剂，具有明显的缓释作用；重组猪复合干扰素，可使非洲猪瘟感染猪排毒量降低。项目的顺利实施为研制安全、有效的ASF黏膜疫苗打好基础。
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