摘要
脂多糖（Lipopolysaccharide LPS）能调控mTOR信号通路影响炎症反应及乳蛋白的合成。而L-精氨酸(L-Arg）可以经Arg-NO途径及mTOR途径发挥免疫作用并促进蛋白质的沉积。本试验采用LPS刺激中国荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞建立免疫模型，研究应激条件下L-精氨酸（L-Arg)对奶牛乳腺上皮细胞炎症反应及β-酪蛋白基因表达的影响，旨在探讨L-Arg能否缓解乳腺上皮细胞的免疫应激作用。复苏2代泌乳奶牛乳腺上皮细胞，待长满90%经消化后调整密度接种于6孔板。细胞贴壁后饥饿培养16h，分为四组（每组3个重复，每个孔为一个重复）分别用DMEM/F12培养基（对照组），终浓度为100g/L L-Arg、10g/L LPS、100g/L L-Arg+10g/L LPS的DMEM/F12培养基培养细胞，分别于12h、24h提取细胞总RNA。以β-actin为内参采用Real-time PCR法检测Toll样受体4（TLR4），细胞核因子（NFκB），白介素-1（IL-1β），白介素-6（IL-6），诱导型一氧化氮合成酶（iNOS），哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR），β-酪蛋白（CSN2 ） mRNA的相对表达。12h时与对照组相比较，添加LPS组能显著上调TLR4、NFκB、IL-1β、IL-6、iNOS、mTOR的表达（P<0.05）；而与LPS组相比，添加L-Arg+LPS组中TLR4，mTOR的表达显著降低（P<0.05）。24h时与对照组相比，添加L-Arg组中mTOR的上调差异显著（P<0.05），添加LPS组NFκB、IL-1β、IL-6、iNOS的表达上调仍然显著（P<0.05），而mTOR的表达差异不显著（P>0.05），CSN2的表达显著降低（P<0.05）；与 L-Arg组相比添加L-Arg+LPS组中TLR4、NFκB、IL-1β、IL-6、iNOS、mTOR表达显著上调（P<0.05），而CSN2的表达差异不显著（P>0.05）；与LPS组相比添加L-Arg+LPS组中TLR4、NFκB及炎症因子IL-1β、IL-6的表达显著降低（P<0.05），β-酪蛋白基因CSN2的表达显著增加（P<0.05）。LPS刺激泌乳奶牛乳腺上皮细胞促进了炎症因子的表达，并降低β-酪蛋白的表达，而L-Arg能缓解乳腺上皮细胞的炎症反应及β-酪蛋白表达的抑制作用。
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