摘要
自2010年以来，鸭坦布苏病毒（Tembusu virus, TMUV）感染给我国水禽养殖业造成了严重的经济损失。为了明确TMUV致弱的分子基础，利用坦布苏病毒反向遗传操作平台，拯救E基因嵌合病毒、不同结构域或单点突变病毒并对其在鸭体内的致病力进行研究。发现E基因替换后，可以影响强毒FX2010在鸭间的传播能力，且E蛋白结构域II上的120位氨基酸由D突变为N，导致E蛋白增加了一个高甘露糖型的N连接糖基化位点，该位点是影响坦布苏病毒在鸭体内组织嗜性和在鸭间传播能力的关键氨基酸。通过将病毒在BHK-21细胞连续传代的方式获得了一株TMUV减毒疫苗候选株JXSP-P310，并发现弱毒株共发生了23个氨基酸突变。E蛋白367位氨基酸突变是导致TMUV细胞适应性增强以及毒力减弱的关键位点。E367（T→K）突变通过降低病毒在血液、脑、心脏（雏鸭）和卵巢的复制，进而减弱对雏鸭和蛋鸭的致病力。进一步研究发现，E367位带正电荷的碱性氨基酸的取代是导致TMUV毒力减弱的重要分子机制。此外，发现病毒E蛋白表位227GSSAGTWQN235参与结合中和单克隆抗体1G2。1G2的被动转移可使感染TMUV 鼠100％存活，具有明显的治愈效果。这些结果阐明了TMUV传播及致病的分子机制，并初探中和性抗体在抗TMUV上的应用可能性。
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