摘要
血管生成在肿瘤发生发展过程中发挥着重要的作用，现已有阻断血管生成过程中某个调节通路从而抑制肿瘤新生血管生成的药物上市，但部分肿瘤患者易产生耐药从而导致疗效欠佳，因此，亟待研发新型的抗血管生成药物。VEGF/VEGFR和Ang/Tie这两条信号通路在调节新生血管生成中发挥着重要的作用，本课题设计可同时表达人VEGFR-2胞外结合区域和人Tie-2胞外结合区域的双基因质粒（VEGFR2/Tie2），利用叶酸修饰纳米脂质体（F-LP）特异性识别卵巢癌细胞表面过表达的叶酸受体，靶向递送至卵巢癌，从而达到较高的转染效率，实现血管生成的双信号通路（VEGF/VEGFR和Ang/Tie）阻断，以达到高效抑制肿瘤新生血管生成的目的，发挥抗癌活性。首先成功构建pVITRO2-VEGFR-2-Tie-2双基因重组质粒，且证明该质粒在细胞内能够成功表达VEGFR-2和Tie-2胞外段蛋白；该质粒被F-PEG-LP装载（F-LP/V-T）后，体外SKOV3细胞内科高效表达VEGFR-2和Tie-2胞外段蛋白；体内药效学研究显示，F-LP/V-T能够显著减少腹腔肿瘤结节数目，降低腹腔肿瘤重量；免疫组化结果显示，F-LP/V-T能够显著降低肿瘤组织中增殖相关标记物Ki-67的表达，同时能够降低血管生成标志物如CD31、VEGFR-2和Tie-2的表达；此外，TUNEL凋亡检测提示F-LP/V-T能够促进肿瘤细胞凋亡；毒性研究显示，治疗组裸鼠重要器官在形态结构上无明显变化，血细胞和血液生化指标也无明显变化。综上，本课题成功构建了可靶向卵巢癌细胞的叶酸修饰纳米脂质体-VEGFR2/Tie2双基因复合制剂，不仅能阻断血管生成的VEGF/VEGFR和Ang/Tie双信号通路发挥抑制肿瘤新生血管生成的作用，还能够显著地抑制肿瘤细胞增殖并促进肿瘤细胞凋亡，且体内应用较为安全，提示该纳米靶向基因治疗制剂具有较高的临床应用潜能。
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