摘要
生物体内的蛋白质通常不是孤立存在的，它们在细胞内会通过结合蛋白质、DNA或RNA，形成复合体来行使生理调控功能。在细胞中，蛋白质相互作用是动态调节的过程。蛋白质相互作用组学研究是发现蛋白质功能的重要途径与手段。P53蛋白是目前已知的最重要的抑癌蛋白，同时它也参与调节细胞自噬、细胞代谢等生物学过程。不同的p53蛋白复合体介导其不同的生物学功能。 本研究筛选了KZNF锌指蛋白家族，最新鉴定了p53转录活性调控蛋白PISA(KZNF568)与PITA(KZNF475)。在细胞内过表达PISA或PITA可以分别抑制代谢调控相关基因SCO2或TIGAR的mRNA转录，降低蛋白表达。染色质免疫共沉淀实验证明它们在体内都能抑制p53蛋白结合到SCO2与TIGAR的启动子。同时，还鉴定了一个新的p53结合蛋白，ABRO1，免疫共沉淀实验确定它能与p53及USP7形成三元复合体，调控p53蛋白的稳定性。细胞克隆形成实验发现它以依赖p53的方式抑制细胞增殖。进一步分析发现YY1可以调控ABRO1转录活性。P53蛋白亚细胞定位与其转录活性密切相关，发现p53诱导激活的Ei24与p53入核转运受体impα/β1具有很强的亲和力，免疫荧光实验及免疫共沉淀等实验证明它们在体内体外都可以形成复合体，进而抑制p53蛋白的核定位。除此以外，我们初步分析了在胚胎着床模型中，p53与miRNA间的调控关系，发现调控p53的4个miRNA（miR-296-3p、miR-193、miR-98及miR-151-3p）在胚胎着床的第8天表达上调，3个miRNA(miR-34c、miR-200a及miR-200b)表达下调，同时发现启动子上具有p53结合位点的13个miRNA在胚胎着床的第8天表达发生变化。以上实验为了解p53蛋白的功能与调控机制提供了新的证据。
NSTRS