查看更多>>摘要:2'-岩藻糖基乳糖(2'-Fucosyllactose,2'-FL)是一种岩藻糖化人乳低聚糖,具有预防肠道疾病、提高免疫力、促进大脑发育等重要生理功能.基于基因组水平,通过敲除大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中2'-FL合成前体物质相关代谢基因,如 β-半乳糖苷酶基因(β-galactosidase,lacZ)、UDP-葡萄糖脂质载体转移酶基因(undecaprenyl-phosphate glucose-1-phosphate transferase,wcaJ)和GDP-甘露糖基水解酶基因(GDP-mannose mannosyl hydrolase,nudD),构建2'-FL合成底盘细胞;在此基础上,将外源α-1,2-岩藻糖基转移酶基因(α-1,2-Fucosyltransferase,wbgL)和磷酸甘露糖变位酶基因(phosphomannomutase,manB)、甘露糖-1-磷酸鸟苷转移酶基因(annose-1-phosphate guanylyltransferas,manC)、GDP-D-甘露糖-4,6-脱水酶基因(GDP-mannose 4,6-dehydratase,gmd)和GDP-岩藻糖合酶基因(GDP-L-fucose synthase,wcaG)引入到大肠杆菌基因组中,探究在基因组水平过表达2'-FL合成基因对2'-FL产量的影响.结果表明,2'-FL在所构建菌株B-05的摇瓶含量达到了1.99 g·L-1.进一步通过摇瓶发酵优化确定了最优发酵条件:IPTG诱导浓度为0.4 mmol·L-1、诱导时OD600为2.4,诱导温度为28℃.在此条件下,摇瓶中2'-FL合成量达到了3.92 g·L-1.最后在5 L发酵罐中,2'-FL含量达到了43.48 g·L-1.研究表明通过将外源2'-FL相关合成基因导入基因组中进行过表达,实现了2'-FL高效合成,为构建整合型2'-FL菌株提供了数据支撑.