查看更多>>摘要:目的 本研究采用体外氧糖剥夺(OGD)模型探讨右美托咪定(Dex)在缺血性脑卒中(IS)对人脑星形胶质细胞(HA)中的作用,并揭示其潜在机制.方法 以H A为研究对象,按照随机数字表法分为10组(每组3孔):对照组(Control组),OGD组,分别使用 0.5、1.0、2.0 µmol/L Dex处理 OGD模型组(0.5 µmol/L Dex+OGD 组、1.0 μmol/L Dex+OGD 组、2.0 μmol/L Dex+OGD组),在OGD模型细胞中添加200 nmol/L K-252a[脑源性神经营养因子(BDNF)抑制剂]组(OGD+K-252a组),在OGD模型细胞中添加 1.0 μmol/L Dex组(OGD+Dex组),在OGD模型细胞中联合使用 1.0 µmol/L的 Dex和200 nmol/L K-252a组(OGD+Dex+K-252a组),在正常细胞中添加200 nmol/L K-252a组(K-252a组),正常细胞中联合使用200 nmol/L K-252a和5 μmol/L的BAY11-7082[NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)抑制剂]组(K-252a+BAY 11-7082组).以上细胞处理24h后,采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞中BDNF、NLRP3、活性胱天蛋白酶-1(caspase-1)和消皮素D(GSDMD)蛋白N端(GSDMD-N)的蛋白水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测白细胞介素(IL)-1β和IL-18的含量,2',7'-二氯荧光素二乙酸盐(DCFDA)法检测细胞中活性氧(ROS)的水平,流式细胞仪检测细胞焦亡情况.结果 与Control组比较:OGD组IL-1β、IL-18含量,ROS荧光强度,细胞焦亡率,NLRP3、活性caspase-1、GSDMD-N蛋白水平均升高(均P<0.05),BDNF蛋白水平降低(P<0.05);0.5μmol/LDex+OGD组IL-18含量、ROS荧光强度、细胞焦亡率均升高(均P<0.05);1.0 μmol/L Dex+OGD组和2.0 µmol/L Dex+OGD组ROS荧光强度、细胞焦亡率均升高(均P<0.05);K-252a组IL-1β、IL-18含量,细胞焦亡率,NLRP3、活性caspase-1、GSDMD-N蛋白水平均升高(均P<0.05).与OGD组比较:0.5 μmol/L Dex+OGD 组、1.0 μmol/L Dex+OGD 组、2.0 µmol/L Dex+OGD 组 IL-lβ、IL-18 含量,ROS 荧光强度,细胞焦亡率均降低(均 P<0.05);1.0 μmol/L Dex+OGD 组、2.0 μmol/L Dex+OGD 组 BDNF 蛋白水平升高(均 P<0.05);0.5 µmol/L Dex+OGD 组、1.0 μmol/L Dex+OGD组NLRP3蛋白水平降低(均P<0.05);1.0 μmol/L Dex+OGD组、2.0 µmol/L Dex+OGD组活性caspase-1 蛋白水平降低(均 P<0.05);0.5 µmol/L Dex+OGD 组、1.0 μmol/L Dex+OGD 组、2.0 µmol/L Dex+OGD 组 GSDMD-N 蛋白水平降低(均P<0.05);OGD+K-252a组IL-1β、IL-18含量,ROS荧光强度,细胞焦亡率,NLRP3、活性caspase-1、GSDMD-N蛋白水平均升高(均P<0.05),BDNF蛋白水平降低(P<0.05);OGD+Dex组IL-1β、IL-18含量,ROS荧光强度,细胞焦亡率,NLRP3、活性caspase-1、GSDMD-N蛋白水平均降低(均P<0.05),BDNF蛋白水平升高(P<0.05).与OGD+Dex组比较,OGD+Dex+K-252a组IL-1β、IL-18含量,ROS荧光强度,细胞焦亡率,NLRP3、活性caspase-1、GSDMD-N蛋白水平均升高(均P<0.05),BDNF蛋白水平降低(P<0.05).与K-252a组比较,K-252a+BAY 11-7082组IL-1β、IL-18含量,细胞焦亡率,NLRP3、活性caspase-1、GSDMD-N蛋白水平均降低(均P<0.05).结论Dex通过诱导BDNF的释放,阻断NLRP3通路的过度活化从而减轻由OGD诱导的星形胶质细胞炎症和细胞焦亡.