查看更多>>摘要:目的 探究转录因子Nrf2通过在复氧过程中保护线粒体功能和DNA促进内皮细胞存活和肺稳态的机制.方法 根据实验要求,将实验小鼠分为Nrf2基因敲除组(Nrf2-/-)和野生型组(Nrf2+/+),每组10只,培养的细胞为Nrf2 siRNA组.使用改良方法分离小鼠肺血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cell,MLVEC).麻醉后,向小鼠右心室灌注磷酸缓冲盐溶液,以清除肺部血液.将周围的胸膜下肺组织切成小块,并在含有20%胎牛血清,25 mmol/L HEPES,3.7 g/L NaHCO3、5 mg/ml肝素,1 mg/ml氢化可的松,80 mg/ml内皮细胞生长补充剂的改良伊格尔培养基中培养内皮细胞.酶标仪检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,活性氧分析试剂盒检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平,酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒测定谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)活性;蛋白印迹分小鼠血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、醌氧化还原酶1(quinone oxidoreductase 1,Nqo1)的蛋白表达;萤光素-萤光素酶测定法检测腺嘌呤核苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)释放,细胞色素C免疫测定试剂盒测量线粒体中的细胞色素C水平;MTT法比较细胞增殖情况.结果 Nrf2基因敲除组较野生型组ROS水平升高(P<0.05),SOD、GPx水平降低(P<0.05),HO-1、Nqo1的蛋白表达降低(P<0.05),细胞色素C水平升高(P<0.05),ATP合成量、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)电位水平降低(P<0.05).Nrf2 siRNA组较正常培养细胞组细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞组细胞活力降低(P<0.05).结论 Nrf2在机体复氧过程中可降低氧化应激反应,抑制线粒体功能受损,促进内皮细胞的生存从而保护肺稳态.