查看更多>>摘要:目的 观察脓毒症患者外周血Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)表达谱变化,分析活化TLR7对脓毒症患者CD8+T细胞杀伤活性的影响.方法 采用横断面研究方法,纳入2020年6月至2021年6月在新乡医学院第一附属医院就诊的脓毒症患者和对照者,于就诊本院后1 h内采血,分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),逆转录实时定量PCR法检测PBMCs中TLR1~10 mRNA,流式细胞术检测CD8+T细胞中TLR7和TLR9,分析TLR对预后的诊断价值.分选CD8+T细胞,使用TLR7激动剂CL097刺激CD8+T细胞,CD8+T细胞与人脐静脉内皮细胞直接接触或间接接触共培养,检测免疫检查点受体表达、靶细胞死亡比例、毒性分子和细胞因子分泌.组间比较采用t检验或Mann-Whitney检验,刺激前后比较采用配对t检验或配对Wilcoxon秩和检验.结果 纳入58例脓毒症患者和24例对照者.PBMCs中TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR8 和TLR10 mRNA 在脓毒症患者和对照者之间的差异无统计学意义(均P>0.05).脓毒症患者PBMCs中TLR9 mRNA低于对照者[0.94(0.81,1.15)vs.1.14(0.82,2.12),P=0.046],但CD8+T细胞中TLR9平均荧光强度与对照者差异无统计学意义[(23.83±7.44)vs.(24.95±7.97),P=0.548].脓毒症患者 PBMCs 中 TLR7 mRNA[1.01(0.88,1.15)vs.1.61(1.04,2.63),P<0.001]和 CD8+T 细胞中 TLR7 平均荧光强度[(130.0±45.07)vs.(250.9±79.09),P<0.001)均低于对照者.对脓毒症患者存活组和死亡组TLR7水平进行ROC曲线分析,TLR7 mRNA和TLR7MFI曲线下面积分别为0.70和0.73(均P<0.05),预测价值较好.脓毒症患者CD8+T细胞中免疫检查点受体mRNA表达升高、直接接触杀伤功能及分泌毒性分子、细胞因子水平降低(均P<0.05).在直接接触共培养体系中,CL097刺激可增加脓毒症患者CD8+T细胞诱导靶细胞死亡比例[(11.92±2.81)%vs.(9.28±2.03)%,P=0.008],促进毒性分子和细胞因子分泌.在间接接触共培养体系中,CD8+T细胞诱导靶细胞死亡比例和毒性分子分泌在经CL097刺激和无CL097刺激之间的差异无统计学意义.结论 TLR7水平降低对脓毒症患者预后不佳有提示意义.脓毒症患者存在CD8+T细胞功能衰竭,TLR7激动剂可增强脓毒症患者CD8+T细胞杀伤功能.