查看更多>>摘要:目的 探讨瞬时受体电位阳离子通道6(TRPC6)对糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)小鼠肾小管间质炎症的影响及其机制.方法 将6周龄雄性C57BL/6J小鼠36只随机分为6组,每组6只.对照组(A组)和DKD组(B组)分别腹腔注射0.1 mmol/L柠檬酸盐缓冲液和10 g/L链脲佐菌素(后简称给药);DKD+生理盐水干预组(C组)和DKD+线粒体自噬激活剂干预组(D组)在B组基础上分别灌胃生理盐水和10 mmol/L尿石素A;DKD+阴性对照慢病毒转染组(E组)和DKD+TRPC6敲降慢病毒转染组(F组)在B组基础上分别尾静脉注射阴性对照慢病毒和TRPC6敲降慢病毒.测定各组小鼠给药后第12周时的全血空腹血糖(FBG)水平、尿微量白蛋白肌酐比(ACR)和血尿素氮(BUN)水平,PAS染色观察小鼠肾小管损伤情况并进行评分,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测小鼠肾组织中炎性因子(IL-1β、MCP-1、TNF-α)mRNA水平,免疫组织化学染色观察小鼠肾组织中TRPC6蛋白表达水平,蛋白免疫印迹检测小鼠肾组织中TRPC6、LC3B、P62、PINK1、Parkin相对表达量,透射电镜观察小鼠肾小管细胞中线粒体自噬体数量变化.将HK-2细胞分为高糖+TRPC6 siRNA+DMSO干预组(G组,TRPC6 siRNA转染+35.0 mmol/L葡萄糖+0.06%DMSO)和高糖+TRPC6 siRNA+线粒体自噬抑制剂干预组(H组,TRPC6 siRNA转染+35.0 mmol/L葡萄糖+12 μmol/L千层纸素A),RT-qPCR技术检测细胞中炎性因子(IL-1β、MCP-1、TNF-α)mRNA的水平.结果 给药后第12周时,B组小鼠全血FBG水平、ACR、BUN水平、肾小管损伤评分、肾组织炎性因子mRNA水平及TRPC6、P62蛋白表达水平均显著高于A组(t=2.77~13.61,P<0.05),肾组织 LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ 及 PINK1、Parkin 蛋白表达水平显著低于 A 组(t=3.33~14.63,P<0.05),肾小管细胞中线粒体自噬体数量减少;D组小鼠ACR、BUN水平、肾小管损伤评分、肾组织炎性因子mRNA水平及P62蛋白表达水平显著低于C组(t=2.40~23.50,P<0.05),肾组织LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ及PINK1、Parkin蛋白表达水平显著高于C组(t=5.74~12.50,P<0.05),肾小管细胞中线粒体自噬体数量增多;F组小鼠ACR、BUN水平、肾小管损伤评分、肾组织炎性因子mRNA水平及TRPC6、P62蛋白表达水平均显著低于E组(t=2.45~7.09,P<0.05),肾组织 LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ 及 PINK1、Parkin 蛋白表达水平显著高于 E 组(t=7.91~13.18,P<0.05),肾小管细胞中线粒体自噬体数量增多;H组细胞的炎性因子mRNA水平显著高于G组(t=5.40~7.27,P<0.05).结论 TRPC6可通过上调自身表达,抑制肾小管细胞线粒体自噬,从而加重DKD小鼠的肾小管间质炎症.TRPC6抑制药物有希望用于DKD治疗.