查看更多>>摘要:目的 分析NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白 3(NLRP3)炎性小体在治疗性浅低温(34℃)后处理的大鼠离体心肌缺血-再灌注模型中的作用并探讨其机制.方法 选择清洁级成年雄性SD大鼠60只,7~10 周龄,体重250~300 g.采用随机数字表法将大鼠分为五组:空白对照组(S组)、心肌缺血-再灌注组(IR组)、34℃浅低温后处理心肌缺血-再灌注组(MH组)、34℃浅低温后处理心肌缺血-再灌注+3-TYP组(HT组)和 34℃浅低温后处理心肌缺血-再灌注+3-TYP+MCC950组(HTM组),每组12只.S组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏180 min;IR组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min,37℃灌注液再灌注120 min;MH组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏 30 min后,缺血 30 min,34℃灌注液再灌注 120 min;HT组在 37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min,在灌注液中加入沉默信息调节因子2 同源蛋白3(sirt3)抑制剂3-TYP后行34℃灌注液再灌注 120 min;HTM组在37℃灌流液平衡灌流大鼠心脏30 min后,缺血30 min,在灌注液中加入sirt3 抑制剂 3-TYP和NLRP3 抑制剂MCC950 后行 34℃灌注液再灌注 120 min.再灌注 120 min后取离体心脏,采用ELISA法测定灌注后心脏漏液中IL-1β、IL-6 浓度,Western blot法检测心肌组织中NLRP3 和sirt3 蛋白相对含量,1%氯化三苯基四氮唑染色计算心肌梗死面积,HE染色观察心肌病理变化.结果 与S组比较,IR组、MH组、HT组和HTM组再灌注 30、60、90、120 min时HR明显减慢,LVSP、dp/dtmax明显降低,LVEDP明显升高;心脏漏液中IL-6 和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比明显升高(P<0.05);IR组、HT组和HTM组心肌组织中sirt3 蛋白含量明显降低,NLRP3 蛋白含量明显升高(P<0.05);MH组心肌组织中sirt3 和NLRP3 蛋白含量明显升高(P<0.05).与IR组比较,MH组和HTM组再灌注 30、60、90、120 min时HR明显增快,LVSP、±dp/dtmax明显升高,LVEDP明显降低;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比明显降低(P<0.05);MH组心肌组织中sirt3 蛋白含量明显升高,NLRP3 蛋白含量明显降低(P<0.05);HTM组心肌组织中NLRP3 蛋白含量明显降低(P<0.05).与 MH 组比较,HT 组再灌注 30、60、90、120 min 时 HR 明显减慢,LVSP、±dp/dtmax明显降低,LVEDP明显升高;心脏漏液中IL-6 和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比、心肌组织中NLRP3 蛋白含量明显升高(P<0.05);HT组和HTM组心肌组织中sirt3 蛋白含量明显降低(P<0.05).与HT组比较,HTM组再灌注 30、60、90、120 min时HR明显增快,LVSP、±dp/dtmax明显升高,LVEDP明显降低;心脏漏液中IL-6和IL-1β浓度、心肌梗死面积百分比、心肌组织中NLRP3 蛋白含量明显降低(P<0.05).结论 治疗性浅低温(34℃)可通过改善离体心脏血流动力学参数、降低IL-6、IL-1β浓度、心肌组织中NLRP3 蛋白含量、心肌梗死面积百分比、改善心肌病理学改变,减轻大鼠心肌缺血-再灌注损伤,其机制可能与线粒体介导sirt3 通路抑制炎性小体NLRP3 的高表达有关.