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期刊信息/Journal information
农业生物技术学报
中国农业大学 中国农业生物技术学会
农业生物技术学报

中国农业大学 中国农业生物技术学会

武维华

月刊

1674-7968

nsjxb@cau.edu.cn

010-62733684

100193

北京海淀区圆明园西路2号中国农业大学生命科学楼1053室

农业生物技术学报/Journal Journal of Agricultural BiotechnologyCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>《农业生物技术学报》创刊于1993年，由中华人民共和国教育部主管，中国农业大学与中国农业生物技术学会共同主办，是一份为农业生物技术研究与发展提供服务的科学期刊。现任主编武维华院士，著名的植物生理学与生物化学家。主要刊登与农业科学有关的植物、动物、微生物及林业、海洋等学科在组织、器官、细胞、染色体、蛋白质、基因、酶、发酵工程等不同水平上的农业生物技术研究成果；刊登与农业有关的遗传与育种、生理、生化与分子生物学、环境与生态、医学、病理学等与基础与应用基础研究成果。
正式出版
收录年代

    UGGT1基因敲低对牛病毒性腹泻病毒复制的影响

    史慧君陈俊贞葛丽娟权冉...
    1968-1977页
    查看更多>>摘要：牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)感染引起牛病毒性腹泻/黏膜病(Bovine viral diarrhea/Mucosal disease,BVD/MD),会造成犊牛持续性感染和腹泻黏膜病,其中粘膜病的病死率高达100％,对规模化养殖和生物制品安全造成严重威胁.本课题组前期使用Turbo ID系统筛选出UDP-葡萄糖糖蛋白糖基转移酶1(UDP-glucose glycoprotein glucosyltransferase 1,UGGT1)等多个BVDV感染后的差异基因.为探索UGGT1基因对牛病毒性腹泻病毒复制的影响,本研究利用CRISPR/Cas9技术敲低胎牛肾(Madin-Darby bovine kidney,MDBK)细胞的UGGT1基因,Western blot检测UGGT1基因敲低情况;显微镜观察细胞形态变化,并统计细胞增殖情况;BVDV分离株TC感染UGGT1敲低细胞和阴性对照组Scramble细胞,使用免疫荧光染色、qPCR、致细胞病变效应(cytopathic effects,CPE)及病毒滴度变化检测UGGT1基因对BVDV复制的影响.结果显示,成功敲低MDBK细胞的UGGT1基因;且UGGT1敲低细胞、Scramble细胞与野生型MDBK细胞的形态及生长速度没有差异;与Scramble相比,BVDV感染UGGT1敲低细胞36 h后标记双链RNA(double strand RNA,dsRNA)的绿色荧光明显减少;感染24 h后5'UTR RNA水平显著降低(P<0.05),48 h时具有极显著性差异(P<0.01);BVDV感染36 h后,滴度显著降低(P<0.05);感染36 h后Scramble中大量细胞病变后脱落,UGGT1敲低细胞病变情况明显低于阴性对照.本研究表明敲低UGGT1基因能够抑制BVDV的复制,为防控BVDV新方法的建立提供了重要依据.

    UDP-葡萄糖糖蛋白糖基转移酶1(UGGT1)牛病毒性腹泻病毒(BVDV)CRISPR/Cas9复制

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    矮小体型芦花鸡GHR基因突变类型分析及其与正常体型芦花鸡发育差异研究

    郑嘉辉冷奇颖张为露Ali Hassan NAWAZ...
    1978-1989页
    查看更多>>摘要：矮小鸡(Gallus domesticus)由于其体型小,节约养殖空间等优点常被用于鸡配套系生产.本研究为明确矮小体型芦花鸡的生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)基因突变类型,探究正常体型芦花鸡和矮小体型芦花鸡间的生长发育差异,针对矮小体型芦花鸡GHR基因常见的4种突变位点设计引物,以矮小体型芦花鸡的基因组DNA为模板进行PCR扩增,分析其遗传变异类型.同时比较分析了正常体型芦花鸡与矮小体型芦花鸡体重和胫长的发育特点,使用Logistic、Gompertz和Von Bertalanffy 3种数学模型拟合分析了其最适模型和拟合参数.结果显示,与正常体型芦花鸡相比,矮小体型芦花鸡GHR基因缺失了1781 bp的碱基序列.正常体型芦花鸡与矮小体型芦花鸡在1～13周龄期间发育差异明显,尤其在体重和胫长2个性状对比明显.Logistic是正常体型芦花鸡与矮小体型芦花鸡体重的最优拟合模型(R2>0.990).对于胫长而言,在雄性芦花鸡中,正常体型芦花鸡的最佳拟合模型为Logistic,矮小体型芦花鸡的最适拟合模型为Von Bertalanffy.在雌性芦花鸡中,正常体型芦花鸡和矮小体型芦花鸡的最佳拟合模型均为Von Bertalanffy.本研究为芦花鸡精细饲养管理和矮小芦花鸡的分子标记辅助育种提供了参考依据.

    矮小体型芦花鸡正常体型芦花鸡生长激素受体(GHR)基因突变类型品系差异

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    兴义鸭MEF2C基因可变剪切体的组织表达差异研究

    叶涛杨华婷李辉罗韦...
    1990-1998页
    查看更多>>摘要：目前关于鸭(Anas platyrhynchos)中肌细胞增强因子2C基因(myocyte enhancer factor 2C,MEF2C)剪切体的表达尚未开展深入研究.为了解MEF2C基因2个剪切体在组织中的表达差异,本研究运用RT-PCR技术克隆兴义鸭MEF2C基因的全长CDS;运用qPCR技术,检测MEF2C基因在兴义鸭(公和母)5个不同发育时期的组织表达.结果显示,克隆获得鸭MEF2C基因2个剪切体MEF2C-a(GenBank No.MZ497418)和MEF2C-b(GenBank No.MZ497419);2个剪切体所编码的氨基酸序列与原鸽(Columba livia)、鹌鹑(Coturnix japonica)、原鸡(Gallus gallus)等物种的同源性高达95％以上,说明MEF2C基因在进化过程中具有较高的保守性.qPCR结果显示,MEF2C-a和MEF2C-b在公鸭和母鸭组织中均有表达,在脑、心肌、腿肌和胸肌组织中高表达;2个剪切体在母鸭和公鸭组织中的表达规律不同,在公鸭多数组织中MEF2C-a表达量高于MEF2C-b,在母鸭中则相反;2个剪切体在腿肌和胸肌中的表达不随日龄的增加而升高.本研究结果为进一步探讨MEF2C基因不同剪切体在鸭肌肉发育过程中的作用机制提供基础资料.

    兴义鸭肌细胞增强因子2C基因(MEF2C)可变剪接组织表达

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    枯草芽胞杆菌拮抗尖孢镰刀菌的抑菌物质分析

    乔欣蕾凡雪蕊霍晓毅张学超...
    1999-2007页
    查看更多>>摘要：枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)菌株Z-5对多种植物病原真菌具有显著的拮抗效果.本研究通过对峙培养法检测菌株Z-5对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的拮抗作用,通过透明圈法检测无菌滤液蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶及嗜铁素活性,利用酸沉淀法提取抑菌物质并采用抑菌圈法检测提取物对尖孢镰刀菌的拮抗效果,利用高效液相色谱(HPLC)对提取物进行分离,通过抑菌圈法对分离的组分进行活性检测,并通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)和二级质谱(mass spectrometry/mass spectrometry,MS/MS)对抑菌物质结构进行鉴定.结果表明,菌株Z-5对尖孢镰刀菌呈现显著的拮抗活性,无菌滤液具有显著的蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶活性及嗜铁素活性.提取物对尖孢镰刀菌呈现显著的拮抗效果并获得3个抑菌活性组分,经鉴定为脂肽类抗生素C14伊枯草菌素A(iturin A)、C15伊枯草菌素A和C14-C18芬芥素A(fengycin A).枯草芽胞杆菌菌株Z-5合成抑菌物质检测为研究其抑菌机制及生防菌株的有效利用提供了参考依据.

    尖孢镰刀菌拮抗枯草芽胞杆菌抑菌物质质谱

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    伪狂犬病病毒Ⅱ型感染PK-15细胞的转录组学分析

    李海敏俞天奇金玉兰顾金燕...
    2008-2015页
    查看更多>>摘要：伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染猪(Sus scrofa)可引起烈性接触性传染病,即伪狂犬病(Pseudorabies,PR),临床上主要通过疫苗免疫进行防控.PRV变异株(PRVⅡ型)的流行使传统疫苗失去有效保护.近年来出现PRV跨宿主感染人(Homo sapiens)的案例,更使PRV成为全球公共卫生威胁,但其感染致病机制仍不完全清楚.为从分子水平上全面了解PRV感染宿主细胞引起的变化,本研究以PRVⅡ型毒株PRV-DX感染猪肾细胞PK-15,通过高通量测序获得PRV感染后全部的细胞差异转录组数据,并对差异表达基因进行功能富集.结果表明,PRV-DX感染PK-15可引起3595条基因表达上调、3604条基因表达下调.通过qPCR验证随机选择的12条差异表达基因,其变化趋势与转录组数据一致.GO注释和KEGG信号通路富集将差异表达基因聚焦在代谢、基因表达、免疫等信号通路.本研究为深入解析PRV感染的致病机制提供了重要基础数据及研究方向.

    伪狂犬病病毒Ⅱ型(PRVⅡ)高通量测序差异转录组

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    LAMP扩增产物检测方法研究进展及基因编辑技术在其中的应用

    白榕白琳琳汪少芸张芳...
    2016-2030页
    查看更多>>摘要：随着恒温扩增技术的快速发展,扩增产物的检测成为限制该技术快速推广和应用的关键.本文结合环介导恒温扩增技术(loop mediated isothermal amplification,LAMP)特点以及传统检测方法,探究了近几年发展起来的新型产物检测方法,如基于反应体系中副产物生成分析的方法、多重靶标检测为目标的方法,以及利用CRISPR/Cas等的序列特异性的可视化检测方法的原理和应用现状,解析了LAMP产物检测面临的机遇和挑战,旨在为核酸分析产业以及基于核酸扩增分析的应用提供支撑.

    环介导等温扩增技术(LAMP)产物检测核酸恒温扩增

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    多重连接探针扩增技术(MLPA)在病原微生物检测与疾病诊断中的应用

    王雨萌周柯邵春艳杨永春...
    2031-2042页
    查看更多>>摘要：多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)是一种可以在单个反应中同时对50个靶基因进行定性和半定量分析的检测方法.其主要步骤包括靶序列DNA变性、探针和靶序列DNA杂交、连接酶连接探针、PCR扩增、毛细管电泳及数据分析.多重连接探针扩增技术已广泛应用于肿瘤的诊断与预后、遗传性疾病的基因检测、产前检测等领域.鉴于混合感染现象增加,敏感、特异和高通量检测方法是当前动物疾病检测中的急需,多重连接探针扩增技术在病原微生物的高通量检测领域显示出良好的应用前景.本文从多重连接探针扩增技术的原理和步骤、在病原微生物检测、肿瘤诊断和遗传性疾病诊断中的应用、优势和不足以及应用前景展望等方面进行综述,以期为MLPA技术在动物病原检测和疾病诊断中的应用和改良提供参考.

    多重连接探针扩增技术(MLPA)甲基化特异性MLPA(MS-MLPA)病原体检测肿瘤诊断遗传疾病诊断

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    猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性毒株HN07-1反向遗传操作平台的构建

    陈鑫鑫王林建乔松林李睿...
    2043-2050页
    查看更多>>摘要：猪繁殖与呼吸综合征是世界规模化猪场的主要疫病之一,主要由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起.本研究旨在构建PRRSV高致病性毒株HN07-1反向操作系统.通过将基因组进行分段克隆和测序的方法获得HN07-1毒株全长基因组序列.运用反向遗传学技术将全基因组分段克隆至载体上,构建含有全长HN07-1毒株cDNA的感染性克隆pcDNA3.2-rHN07-1,并以此为骨架,构建在PRRSV基因组ORF1b和ORF2a间插入增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的重组克隆pcDNA3.2-rHN07-1-EGFP;将构建的质粒转染Marc-145细胞拯救病毒.采用免疫荧光实验(immune fluorescence assay,IFA)和Western blot进行表达鉴定并对重组病毒进行滴度测定与分析.结果表明,PRRSV毒株HN07-1基因组全长15345 nt,转染Marc-145细胞盲传一代后培养48 h出现典型的细胞病变效应,IFA和Western blot检测结果表明,拯救病毒与亲本毒株HN07-1一致,都能检测到PRRSV N蛋白表达.并且拯救病毒与亲本毒株具有相似的生长动力特性.综上所述,本研究成功构建了HN07-1感染性克隆,可用于反向遗传操作,为PRRSV致病机制研究及疫苗研发提供了参考.

    猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HN07-1感染性克隆反向遗传技术病毒拯救

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    抗猪伪狂犬病毒gE蛋白纳米抗体的表达及功能验证

    郭玉堃马英先明胜利郭瑞珍...
    2051-2060页
    查看更多>>摘要：伪狂犬病的暴发为其防控带来巨大挑战,建立一种新的特异性高与敏感性强的诊断方法,以及获得有病毒中和效果的抗体,对于该病的防控、治疗至关重要.本研究旨在原核表达出可溶性的抗猪(Sus scrofa)伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)gE(envelope glycoprotein E)蛋白纳米抗体,并对抗猪伪狂犬病毒gE蛋白纳米抗体在猪伪狂犬病毒的诊断和治疗中的应用进行了初步探索.设计并合成了抗猪伪狂犬gE蛋白纳米抗体基因序列,命名为PRVgENb;将PRVgENb与pET21b载体构建后用大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统进行融合蛋白的原核表达,经Ni2+纯化后获得单一纳米抗体PRVgENb;将制备的纳米抗体PRVgENb进行HRP标记后,和PRV毒株用作直接ELISA(direct ELISA)试验和病毒中和试验.结果表明,原核表达与纯化后获得了纯度较高的融合蛋白PRVgENb;直接ELISA结果表明,在抗原浓度一定的条件下,纳米抗体PRVgENb能与特异性抗原在较低浓度条件下结合,具有较高活性,而在抗体浓度一定的条件下,其能敏感的识别低浓度到高浓度区间的特异性抗原;病毒中和试验结果表明,纳米抗体PRVgENb能抑制PRV的复制,有一定的中和活性.本研究建立了稳定获得纳米抗体PRVgENb的方法,并初步探索了其在直接ELISA中的使用,同时证明其能抑制PRV的复制.纳米抗体PRVgENb为PRV的诊断、治疗及后续研究奠定了实验基础.

    猪伪狂犬病毒gE蛋白纳米抗体直接ELISA中和抗体

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