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期刊信息/Journal information
农业生物技术学报
中国农业大学 中国农业生物技术学会
农业生物技术学报

中国农业大学 中国农业生物技术学会

武维华

月刊

1674-7968

nsjxb@cau.edu.cn

010-62733684

100193

北京海淀区圆明园西路2号中国农业大学生命科学楼1053室

农业生物技术学报/Journal Journal of Agricultural BiotechnologyCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>《农业生物技术学报》创刊于1993年，由中华人民共和国教育部主管，中国农业大学与中国农业生物技术学会共同主办，是一份为农业生物技术研究与发展提供服务的科学期刊。现任主编武维华院士，著名的植物生理学与生物化学家。主要刊登与农业科学有关的植物、动物、微生物及林业、海洋等学科在组织、器官、细胞、染色体、蛋白质、基因、酶、发酵工程等不同水平上的农业生物技术研究成果；刊登与农业有关的遗传与育种、生理、生化与分子生物学、环境与生态、医学、病理学等与基础与应用基础研究成果。
正式出版
收录年代

    牛瘤胃微生物纤维二糖水解酶基因(cbh)在乳酸菌中的表达

    孙康永杰杨宇泽魏亚琴万学瑞...
    2375-2386页
    查看更多>>摘要：玉米(Zea mays)秸秆作为牛羊等家畜的主要饲料来源,其中含有大量的纤维素,外源纤维二糖水解酶(cellobiohydrolase,CBH)可促进纤维素在青贮过程中的降解.乳酸菌(Lactococcus lactis)作为益生菌,可提高青贮饲料的品质.本研究粗提黄牛(Bos taurus domestica)瘤胃微生物混合DNA,以其为模板扩增cbh基因并克隆至食品级载体pMG36e,构建分泌型表达载体pMG36e::CBH;将其导入乳酸菌NZ9000中,利用3,5-二硝基水杨酸(3,5-dinitrosalicylic acid,DNS)法测定重组纤维二糖水解酶的酶活,并对重组酶的酶学性质进行分析.结果显示,从牛瘤胃中克隆获得约1600 bp的重组酶序列,其编码蛋白分子量约为56 kD,滤纸酶活为(2.2181±0.8343)U/mL,外切葡聚糖酶的酶活为(10.4992±1.1135)U/mL;重组酶对再生无定型纤维素(regenerated amorphous cellulose,RAC)的特异性最高,微晶纤维素次之,对滤纸和脱脂棉的特异性较低,而对羧甲基纤维素钠(CMC-Na)几乎没有活性;重组纤维二糖水解酶的最适pH为6,最适温度为60℃;1 mmol/L Mn2+、Zn2+、Fe2+、Cu2+、Co2+和1％Tween-20对重组CBH的酶活有促进作用,1 mmol/L Ba2+和Hg2+几乎对酶活无影响,1 mmol/L K+、Mg2+和EDTA对酶活有抑制作用,5 mmol/L Mn2+、Fe2+、Ca2+、Cu2+、Co2+对酶活有促进作用,10％Tween-20和5 mmol/L Zn2+、Ba2+、Hg2+、K+、Mg2+和EDTA对酶活有抑制作用.本研究构建的牛瘤胃微生物cbh基因的重组乳酸菌,有利于促进青贮过程中秸秆纤维素酶解及提高青贮饲料的营养价值.

    瘤胃微生物纤维二糖水解酶(CBH)乳酸菌分泌表达

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    副猪嗜血杆菌ptsG基因缺失株的构建及其部分生物学特性分析

    闫雪锋肖五淀古从伟何曼莉...
    2387-2395页
    查看更多>>摘要：葡萄糖磷酸转移酶系统(glucose-specific phosphotransferase system,PTSGlc)中葡萄糖特异酶ⅡBC(glucose-specific enzymeⅡBC,EⅡBCGlc)对细菌的代谢有着全面的影响,但EⅡBCGlc在副猪嗜血杆菌(Glaesserella parasuis)中的作用还不清楚.本研究采用自然转化法构建副猪嗜血杆菌EⅡBCGlc蛋白的编码基因(phosphotransferase system,ptsG)缺失株及互补株,比较野毒株和缺失株在胰蛋白胨大豆肉汤+葡萄糖培养基的生长状况、细菌形态、生物被膜形成能力、对氧化压力的耐受能力及对小鼠(Mus musculus)的毒力作用.结果表明,ptsG基因敲除后,副猪嗜血杆菌可以摄取更多的还原糖供自身生长.通过透射电镜观察,发现ΔptsG与野生株相比,菌体内部有更多的高电子密度区.此外,ptsG基因的缺失导致副猪嗜血杆菌生物被膜形成能力减弱以及对过氧化氢的耐受能力减弱.而ΔptsG与野生株对小鼠的毒力作用没有明显差异.本研究表明ptsG基因对副猪嗜血杆菌生物被膜的形成和氧化应激耐受能力具有重要的作用,为研究副猪嗜血杆菌的致病机制提供了基础资料.

    副猪嗜血杆菌PTSGlc系统ptsG生物被膜氧化应激

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    新型鸭呼肠孤病毒σC蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定

    华炯钢叶伟成倪征陈柳...
    2396-2406页
    查看更多>>摘要：新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)是近年来发现的一种新病原,可引起各品种鸭及鹅发病,给我国养鸭业造成巨大的经济损失.NDRVσC蛋白是主要的外衣壳蛋白之一,通过细胞受体介导使病毒吸附于宿主细胞,并诱导宿主机体产生型特异性抗体.为制备NDRVσC蛋白的单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)并鉴定其抗原表位,本研究利用原核表达和纯化的重组σC蛋白免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,以重组纯化的σC蛋白为包被抗原,通过间接ELISA方法筛选出4株稳定分泌NDRVσC蛋白的McAbs杂交瘤细胞株A5-A1、A5-B6、A9-D4和B9-6.Western blot结果显示,4株McAbs均能识别NDRV全病毒和原核表达的重组σC蛋白;间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)结果显示,4株McAbs均与NDRV呈阳性反应,与经典鸭呼肠孤病毒(Classical duck reovirus,CDRV)和禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)呈阴性反应.利用人工合成相互重叠的多肽库和一系列截短多肽,对4株McAbs识别的抗原表位进行鉴定,结果表明,3株单抗A5-A1、A5-B6和B9-6识别的核心抗原表位均为177PILSGPADA185,A9-D4单抗识别的抗原表位可能呈空间构象.抗原表位的保守性分析表明,该抗原表位在不同地域和不同宿主来源的NDRV分离株中具有很高的保守性.上述结果表明,177PILSGPADA185是NDRV的型特异性B细胞线性表位.本研究为深入探讨σC蛋白结构和建立NDRV临床检测方法提供基础资料.

    新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)σC蛋白单克隆抗体抗原表位

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    滑液支原体亚甲基四氢叶酸脱氢酶(MTHFD)的原核表达及亚细胞定位

    张宏燕岳亚辉邢小勇龙翠琴...
    2407-2415页
    查看更多>>摘要：滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)是一种重要的禽类致病性支原体,感染鸡(Gallus domesticus)和火鸡(Meleagris gallopavo)后引起渗出性滑膜炎、关节炎、跗跖部肿胀和呼吸道炎,造成养鸡业的重大经济损失.亚甲基四氢叶酸脱氢酶(methylenetetrahydrofolate dehydrogenase,MTHFD)催化5,10-亚甲基四氢叶酸生成5,10-甲炔基四氢叶酸,该酶是叶酸代谢中的关键酶,参与嘌呤核苷酸的合成.为研究滑液支原体MTHFD蛋白的免疫原性及其在MS中的分布,本研究参照GenBank中MS WVU1853株双功能5,10-亚甲基四氢叶酸脱氢酶/5,10-亚甲基四氢叶酸环化水解酶(bifunctional 5,10-methylenetetrahydrofolate dehydrogenase/5,10-methenyltetrahydrofolate cyclohydrolase,folD)基因序列设计引物,利用PCR扩增MS folD基因并对其序列进行分析和优化.结果表明,MS folD基因全长837 bp,与GenBank中其他MS菌株folD基因的序列相似性达99.6％.folD基因克隆至pET-28a(+)质粒后转化至大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,诱导后SDS-PAGE检测表达情况.结果显示重组蛋白(recombinant protein,r)MS MTHFD成功表达,且相对分子质量约为36 kD.纯化蛋白免疫新西兰兔(Oryctolagus cuniculus)制备抗血清,并利用Western blot、ELISA与免疫荧光试验对rMS MTHFD的免疫原性和MTHFD在MS中的分布进行分析.结果表明,rMS MTHFD蛋白具有良好的免疫原性,MTHFD在MS的细胞膜和细胞浆中均有分布,但在胞浆中的含量较多.本研究结果为滑液支原体MTHFD生物学功能的深入研究提供了基础资料.

    滑液支原体(MS)亚甲基四氢叶酸脱氢酶(MTHFD)原核表达亚细胞定位

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    快速聚合酶链式反应装置研究进展

    李佳乐林晟豪许文涛
    2416-2426页
    查看更多>>摘要：聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)因其独有的优势而被广泛应用于多种领域.传统PCR技术耗时较长,一般多于60 min,因此提出快速PCR的方法.本文聚焦快速PCR反应装置,依据热量的传递方式分别介绍和分析了接触式(连续流动、固定腔室、振荡摆动)和非接触式(红外、激光、金属纳米结构、微波、电磁感应)热循环仪.最后,对快速PCR技术中的操作一体化、金属纳米结构进一步研发以及快速热循环仪的商业化生产进行了讨论和展望.本文为今后研发低成本、小型化、自动化、高通量的热循环仪提供参考.

    快速聚合酶链式反应(PCR)热循环仪接触式非接触式

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    bHLH转录因子在植物缺铁调控网络中的作用机制

    赵安娜罗光明罗扬婧宋丹丹...
    2427-2435页
    查看更多>>摘要：铁是植物生长发育所需最重要的微量元素之一.其作为酶辅助因子或电子传递链的组成部分,在植物光合作用、呼吸作用和氨基酸生物合成等多种重要代谢过程中发挥作用.为应对铁缺乏的情况,植物进化出复杂的转录调控网络来维持铁的动态平衡,严格控制铁的吸收、运输、同化和储存.植物调控网络由多种转录因子参与构成,碱性螺旋-环螺旋(basic helix-loop helix,bHLH)家族是其中最关键的转录因子家族之一.本综述对植物响应铁缺乏的2种策略进行了简要概述,介绍了bHLH转录因子的结构、分类与作用形式,并重点讨论了类缺铁所诱导转录因子(ferritin-like iron deficiency-induced transcription factor,FIT)、PYE(POPEYE)、铁转运蛋白1上游调控因子(upsteam regulator of iron-regulated transporter 1,URI)等bHLH转录因子以及缺铁调控蛋白E3泛素连接酶BTS(BRUTUS)在铁稳态调控级联调控中作用的最新进展,以期为bHLH转录因子在植物缺铁应答调控网络中的作用机制研究提供理论基础.

    碱性螺旋-环螺旋家族(bHLH)转录因子缺铁级联调控网络

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    选择信号分析在羊功能基因挖掘中的研究进展

    刘文轩刘倩薇陈冲王琬婷...
    2436-2448页
    查看更多>>摘要：羊(包括山羊(Capra hircus)和绵羊(Ovis aries))是人类主要饲养的家畜之一.羊根据其经济用途可以分为乳用、肉用、绒用和兼用四类.探究种群间选择信号的特征可以清楚地了解种群的遗传进化和选择进展,将正向选择应用于育种可加快遗传进展、缩短育种进程,对选择信号检测到的功能基因进一步验证为致因基因,可实现分子设计育种和重要经济性状的改良.本文综述了五种常用选择信号检测方法不同之处和适用范围,总结了近年来利用选择信号分析挖掘羊重要经济性状功能基因的研究进展,为下一步解析功能基因调控羊重要经济性状形成的分子机制奠定理论基础,为实施分子设计育种实现群体遗传改良或新品种(系)培育提供基因来源与分子素材.

    山羊绵羊选择信号经济性状功能基因挖掘分子设计育种

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    大蒜体细胞胚发生mRNA及miRNA qPCR内参基因的筛选和验证

    李梦倩刘敏张蒙白云赫...
    2449-2464页
    查看更多>>摘要：大蒜(Allium sativum)是无性繁殖的重要蔬菜作物,其体细胞胚发生分子机理的研究还比较薄弱.筛选稳定的内参基因有助于解析体细胞发生过程中基因和miRNA的差异表达.为筛选大蒜体细胞胚发生mRNA和miRNA qPCR检测体系中稳定的内参基因,本研究分别选取大蒜7个mRNA候选内参基因,包括肌动蛋白(actin,AsACTIN)、甘油醛三磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,AsGAPDH)、18S核糖体RNA(18S ribosomal RNA,As18S rRNA)、多聚泛素酶(polyubiquitinase,AsUBQ)、α微管蛋白(α-tubulin,AsTUA)、转录因子LATE ELONGATED HYPOCOTYL(AsLHY)和Brassinosteroid resistant 1(AsBES1)及5个miRNA候选内参基因包括AsU6 snRNA、As5.8S rRNA、AsmiR159a-1、AsmiR168a和AsmiR168a-5p,采用qPCR技术分别检测各内参基因在不同基因型、不同外植体和不同2,4-D浓度作用下不同体细胞胚发育阶段的Ct值,利用Delta CT、BestKeeper、NormFinder和GeNorm 4种方法分析候选内参基因稳定值,并结合RefFinder综合评价候选内参基因的表达稳定性.结果表明:对于mRNA qPCR表达分析,AsACTIN是最适用于不同基因型的内参基因,AsBES1是不同外植体和不同2,4-D浓度处理下最稳定的内参基因,对所有样品进行综合评价,稳定性最好的内参基因是AsBES1.对于miRNA qPCR表达分析,不同基因型中最稳定的内参基因是AsmiR159a-1,AsmiR168a-5p是不同外植体中最稳定的内参基因,As5.8S rRNA是不同2,4-D浓度处理下最稳定的内参基因,综合评价所有样本,最理想的内参基因是AsU6 snRNA.为验证所筛选内参基因的稳定性,以7个mRNA候选内参基因和5个miRNA候选内参基因分别对大蒜体细胞胚发育过程中差异表达的植物激素相关转录因子髓细胞组织增生蛋白(myelocytomatosis protein 2,AsMYC2)和AsmiR167d-1进行qPCR分析.结果显示,以不同外植体中稳定性最好的AsBES1和AsmiR168a-5p为内参时,AsMYC2和AsmiR167d-1的表达趋势与测序数据保持一致,而以其他基因和miRNA为内参时,表达趋势有所不同,进一步证实了所筛选内参基因的可靠性.本研究可为准确检测大蒜体细胞胚发生过程中相关基因和miRNAs的表达提供支持,有助于大蒜体细胞胚发生机理的深入研究.

    大蒜体细胞胚发生内参基因mRNAmiRNAqPCR

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    鸭丙型肝炎病毒TB Green实时荧光定量PCR方法的建立

    陈翠腾万春和陈珍朱春华...
    2465-2472页
    查看更多>>摘要：鸭丙型肝炎病毒(Duck hepacivirus,DuHCV)是近年来从临床表现为产蛋异常鸭(Anas)群中新发现的一种丙型肝炎病毒.为建立DuHCV的分子生物学检测方法用于该病的流行病学调查并进一步探究其致病机制,本研究根据NCBI数据库中DuHCV参考株(HCL-2株,GenBank No.MK737640.1)的NS5B基因特征,设计特异性引物,建立检测DuHCV的TB Green实时荧光定量PCR方法.结果显示,建立的检测DuHCV的TB Green实时荧光定量PCR方法,灵敏度高,最低检测限为64拷贝/μL;特异性好,与鸭群常见传染病病原均无交叉反应,扩增产物的熔解曲线仅DuHCV出现1个特异性单峰,Tm值为(82.22±0.21)℃;重复性好,组内和组间重复试验变异系数分别为0.13％～0.54％和0.53％～1.12％.利用建立的TB Green实时荧光定量PCR方法和常规逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)方法同时对103份临床样品进行DuHCV感染的检测,结果显示,RT-PCR方法检出阳性样品8份,阳性率为7.8％;TB Green实时荧光定量PCR方法检出阳性样品11份,阳性率为10.68％,且8份RT-PCR阳性样品经TB Green实时荧光定量PCR方法检测均为阳性,符合率为100％.本研究为后续开展DuHCV感染的分子流行病学调查和致病机理研究提供技术支撑.

    鸭丙型肝炎病毒NS5B基因TBGreen实时荧光定量PCR

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