查看更多>>摘要:目的 探讨miRNA-423-5p与干扰素调节因子1(IRF1)在肺腺癌中的作用及机制.方法 体外培养肺腺癌细胞A549、H1299和H1975.实验分组:(1)在过表达miRNA-423-5p实验中,mimics NC作为对照组,miRNA-423-5p作为过表达组;(2)在敲降miRNA-423-5p实验中,ASO-NC作为对照组,ASO-miRNA-423-5p作为敲降组;(3)过表达IRF1实验中,pcDNA3.1作为对照组,pcDNA3.1-IRF1作为过表达组;(4)同时过表达miRNA-423-5p和IRF1实验中,mimics NC+pcDNA3.1 作为对照组,miRNA-423-5p+pcDNA3.1 作为只过表达 miRNA-423-5p 组,miRNA-423-5p+pcD-NA3.1-IRF1作为同时过表达miRNA-423-5p和IRF1组.采用CCK-8、克隆形成、5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(EDU)、蛋白质印迹法、Transwell和划痕实验分别检测各组细胞增殖凋亡、侵袭和迁移能力的影响.通过Star Base数据库预测miRNA-423-5p与IRF1的结合位点,双荧光素酶实验验证miRNA-423-5p与IRF1之间的结合作用.裸鼠皮下成瘤实验检测稳定敲降miRNA-423-5p和稳定过表达IRF1细胞对移植瘤生长的影响.多组比较采用单因素方差分析,两组间比较采用独立样本t检验.结果 CCK-8、克隆形成、EDU、蛋白质印迹法、划痕和Transwell实验结果示,过表达miRNA-423-5p会促进H1299细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制H1299细胞的凋亡能力,均P<0.001.敲低miRNA-423-5p会抑制H1299细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进H1299细胞的凋亡能力,均P<0.001.过表达IRF1会抑制H1299细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进H1299细胞的凋亡能力,均P<0.001.过表达IRF1可以挽救过表达miRNA-423-5p对H1299细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的作用,均P<0.001.Star Base数据库预测显示,miR-NA-423-5p与IRF1之间存在结合位点.双荧光素酶实验证明miRNA-423-5p与IRF1可以结合,t=26.470,P<0.001.qRT-PCR(t=7.085,P=0.001)和蛋白质印迹法(t=28.660,P<0.001)实验表明,miRNA-423-5p 可以调节IRF1的表达.裸鼠皮下成瘤实验结果提示,稳定敲降miRNA-423-5p的H1299细胞瘤体体积[(491.40±94.34)mm3 vs(382.20±16.04)mm3,t=2.825,P=0.037]、瘤组织 Ki-67(0.40±0.10 vs 0.24±0.02,t=3.843,P=0.012)和PCNA表达(0.45±0.09 vs 0.25±0.04,t=4.974,P=0.004)均显著降低,稳定过表达IRF1的H1299细胞瘤体体积[(291.50±109.1)mm3 vs(125.46±98.52)mm3,t=2.766,P=0.040]、瘤组织 Ki-67(0.44±0.04 vs 0.25±0.02,t=10.407,P<0.001)和 PCNA 表达(0.39±0.03 vs 0.15±0.02,t=16.305,P<0.001)均显著降低.结论 miRNA-423-5p可能通过调控IRF1促进肺腺癌的恶性表型.