查看更多>>摘要:目的 探讨CircFN1调节miR-375/染色框同源物3(CBX3)轴对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞放射敏感性的影响.方法 将si-NC、si-CircFN1、si-CircFN 1+inhibitor NC和si-CircFN1+miR-375 inhibitor分别转染至ESCC细胞(KYSE-150),分别作为 si-NC 组、si-CircFN1 组、si-CircFN1+inhibitor NC 组和 si-CircFN1+miR-375 inhibitor 组.细胞转染后用2、4、6和8 Gy 6 MV-X射线照射.采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞CircFN1和miR-375表达;蛋白质印迹法检测细胞CBX3蛋白表达;克隆形成实验检测KYSE-150细胞受照后的克隆形成能力;CCK8检测KYSE-150细胞活力;Transwell和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力;双荧光素酶报告基因实验验证CircFN1与miR-375以及miR-375与CBX3的关系.数据以6次重复实验的(X)±S表示,单因素方差分析和SNK-q检验比较多组间差异.结果 2、4、6 和 8 Gy 照射后,si-CircFN1 组较 si-NC 组 KYSE-150 细胞克隆形成率降低,si-CircFN1+miR-375 inhibitor 组较 si-Cir-cFN1 组和 si-CircFN1+inhibitor NC 组克隆形成率升高(P<0.05),si-CircFN1 组、si-CircFN1+inhibitor NC 组和 si-CircFN1+miR-375 inhibitor 组放射增敏比(SER)分别为为 1.352、1.374 和 1.011.在 0 Gy 6 MV-X 射线照射下,si-Cir-cFN1组较si-NC组相比,CircFN1与CBX3水平、迁移率和侵袭细胞数量均下降(P<0.05),miR-375表达量增高(P<0.05);D(450 nm)值(0.51±0.05 vs 0.97±0.11)降低,q=14.196,P<0.001;凋亡率[(16.51±1.45)%vs(5.97± 0.62)%]升高,q=22.412,P<0.001.与 si-CircFN1+inhibitor NC 组相比,si-CircFN 1+miR-375 inhibitor 组 CBX3 水平、迁移率、侵袭细胞数量上升(P<0.05),miR-375 表达量下降(P<0.05),D(450 nm)值(0.94±0.09 vs 0.53±0.05)升高(q=12.653,P<0.001),凋亡率[(6.23±0.67)%vs(15.76±1.55)%]下降,q=20.207,P<0.001.在 4 Gy 6 MV-X射线照射下,si-CircFN1组与si-NC组相比,CircFN1与CBX3水平、迁移率和侵袭细胞数量均下降(P<0.05),miR-375 表达量升高(P<0.05),D(450 nm)值(0.23±0.02 vs 0.77±0.08)下降(q=25.456,P<0.001),凋亡率[(22.23± 2.58)%vs(9.77±0.98)%]升高,q=15.263,P<0.001;与 si-CircFN 1+inhibitor NC 组相比,si-CircFN1+miR-375 in-hibitor 组CBX3水平、迁移率、侵袭细胞数量上升(P<0.05),miR-375表达量均下降(P<0.05),D(450 nm)值(0.73± 0.06 vs 0.22±0.02)上升(q=24.042,P<0.001),凋亡率[(10.34±1.23)%vs(23.67±2.62)%]下降,q=16.329,P<0.001.且4 Gy照射后各组KYSE-150细胞CBX3水平、D(450 nm)、迁移率和侵袭细胞数量低于对应的0 Gy各组,miR-375表达量和凋亡率高于对应的0 Gy各组,均P<0.05.结论 沉默CircFN1可能通过上调miR-375来抑制CBX3表达,进而增加ESCC细胞放射敏感性.