查看更多>>摘要:目的 构建溃疡性结肠炎(UC)小鼠模型,探讨ε-聚赖氨酸、果胶及二者混合物对UC小鼠肠黏膜屏障的影响及可能机制.方法 雄性BALB/c小鼠40只,随机分为对照组、UC组、ε-聚赖氨酸组、果胶组、ε聚赖氨酸+果胶组各8只.所有小鼠给予灌胃预处理,对照组、UC组给予饮用水20 mL/(kg·d),ε-聚赖氨酸组给予ε-聚赖氨酸10 mg/(kg·d),果胶组给予果胶200 mg/(kg·d),ε-聚赖氨酸+果胶组给予ε-聚赖氨酸10 mg/(kg·d)和果胶200 mg/(kg·d),灌胃4周后,UC组、ε-聚赖氨酸组、果胶组、ε-聚赖氨酸+果胶组小鼠自由饮用质量分数3%硫酸葡聚糖溶液9 d构建UC模型,对照组自由饮用饮用水9d.造模后评价5组小鼠疾病活动指数(DAI)评分,测量结肠长度,采用HE染色法观察结肠组织病理形态,采用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平,采用实时荧光定量PCR法检测结肠组织闭合蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白-1(ZO-1)mRNA相对表达量,采用Western blot法检测结肠组织Toll样受体 4(TLR4)、核因子-κB p65(NF-κB p65)、p-NF-κB p65 蛋白相对表达量,并计算 p-NF-KB p65/NF-KB p65.结果 (1)UC 组[(6.75±1.91)分]、ε-聚赖氨酸组[(5.75±1.75)分]、果胶组[(3.00±0.76)分]、ε-聚赖氨酸+果胶组[(6.00±3.21)分]DAI评分均高于对照组(0分)(P<0.05);UC组[(6.96±0.78)cm]、ε-聚赖氨酸+果胶组[(6.79±0.73)cm]结肠长度均短于对照组[(8.10±0.55)cm](P<0.05),ε-聚赖氨酸组、果胶组与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05);UC组、ε-聚赖氨酸+果胶组DAI评分均高于果胶组(P<0.05),结肠长度均短于果胶组(P<0.05),ε-聚赖氨酸组与果胶组比较差异均无统计学意义(P>0.05),UC组、ε-聚赖氨酸组、ε-聚赖氨酸+果胶组比较差异均无统计学意义(P>0.05).(2)对照组结肠组织黏膜上皮结构完整,腺体排列整齐,隐窝正常.UC组黏膜上皮结构不完整,炎症细胞浸润黏膜层2/3以上,以淋巴细胞浸润为主,病变范围>50%,基底层2/3隐窝被破坏.与UC组比较,ε-聚赖氨酸组黏膜上皮结构尚完整,炎症细胞浸润黏膜层1/3以上,病变范围>25%,基底层1/3隐窝被破坏;果胶组黏膜上皮结构较完整,炎症细胞浸润黏膜层1/3以下,病变范围和隐窝破坏程度明显减小.与果胶组比较,ε-聚赖氨酸+果胶组炎症细胞浸润增多,病变范围和隐窝破坏程度增大.(3)UC组、ε聚赖氨酸组、ε-聚赖氨酸+果胶组血清TNF-α水平均高于对照组和果胶组(P<0.05),果胶组与对照组,UC组、ε-聚赖氨酸组、ε-聚赖氨酸+果胶组比较差异均无统计学意义(P>0.05);UC组、ε-聚赖氨酸+果胶组血清IL-6水平均高于对照组(P<0.05),ε-聚赖氨酸组、果胶组与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05);ε-聚赖氨酸组、果胶组血清IL-6水平均低于UC组(P<0.05),ε-聚赖氨酸+果胶组与UC组比较差异无统计学意义(P>0.05),ε-聚赖氨酸组、果胶组、ε聚赖氨酸+果胶组比较差异均无统计学意义(P>0.05).(4)UC组、ε-聚赖氨酸+果胶组结肠组织Occludin、ZO-1 mRNA相对表达量均低于对照组和果胶组(P<0.05),ε-聚赖氨酸组、果胶组与对照组,ε-聚赖氨酸组与果胶组,UC组、ε-聚赖氨酸组、ε聚赖氨酸+果胶组比较差异均无统计学意义(P>0.05).(5)UC组、ε-聚赖氨酸十果胶组结肠组织TLR4蛋白相对表达量均高于对照组(P<0.05),ε-聚赖氨酸组、果胶组与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05);UC组、ε-聚赖氨酸组、ε-聚赖氨酸十果胶组结肠组织p-NF-κB p65/NF-κB p65均高于对照组(P<0.05P<0.05),果胶组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);UC组、ε聚赖氨酸+果胶组结肠组织TLR4蛋白相对表达量及p-NF-KB p65/NF-κB p65均高于果胶组(P<0.05),ε-聚赖氨酸组与果胶组比较差异均无统计学意义(P>0.05);UC组、ε-聚赖氨酸组、ε-聚赖氨酸+果胶组结肠组织p-NF-κB p65/NF-κB p65及TLR4蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 果胶可通过抑制TLR4/NF-KB信号通路减轻结肠组织炎症,保护肠黏膜屏障,预防小鼠UC发生,而ε-聚赖氨酸可减弱果胶对UC小鼠肠黏膜屏障的保护作用.