查看更多>>摘要:该文探讨了三溴丙酮酸(3-bromopyruvate,3-BP)对低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)的作用及机制.取生长状态良好的 PASMCs,在其细胞密度为60%~70%时,细胞饥饿处理24 h.随机将细胞分成4组:正常对照组(Normal组)、正常+3-BP组(Normal+3-BP组)、低氧造模组(Hypoxia组)、低氧+3-BP组(Hypoxia+3-BP组).通过CCK-8检测3-BP抑制低氧诱导PASMCs增殖的最适浓度;EDU检测各组细胞增殖情况;Western blot检测各组细胞己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)、丙酮酸脱氢酶(pyruvate dehydrogenase,PDH)、M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase isozyme type 2,PKM2)、血清核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(nu-cleotide-binding oligomerization domain,leucine-rich repeat and pyrin domain-containing 3,NLRP3)、GSDMD 蛋白 N-端片段(gasdermin D,GSDMD-N)、半胱氨酸蛋白酶-l(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase-1)、白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的蛋白表达变化;乳酸试剂盒检测各组细胞乳酸含量;免疫荧光法检测各组细胞HK2、NLRP3基因表达情况;ELISA法检测各组细胞IL-1β、IL-18蛋白含量.结果显示,3-BP抑制低氧诱导的PAMSCs增殖的有效浓度为40 μmol/L.与Nor-mal组相比,Hypoxia组PAMSCs增殖显著增多(P<0.000 1),PCNA蛋白表达水平明显上升(P<0.05),HK2、PKM2蛋白表达水平显著上升(P<0.01),PDH蛋白表达水平明显下降(P<0.000 1),NLRP3蛋白表达水平上升(P<0.01)、GSDMD-N蛋白表达水平上升(P<0.001)、P20蛋白表达水平上升(P<0.05)、IL-1β蛋白表达水平上升(P<0.000 1)、IL-18蛋白表达水平上升(P<0.05);乳酸含量明显增多(P<0.000 1);免疫荧光显示HK2阳性表达细胞数显著增加(P<0.001)、NLRP3阳性表达细胞数显著增加(P<0.000 1);各组肺组织IL-1β含量增多(P<0.001)、IL-18含量增多(P<0.01).与Hypoxia组相比,Hypoxia+3-BP组PAMSCs增殖显著减少(P<0.001),PCNA蛋白表达水平下降(P<0.01),HK2蛋白表达水平明显下降(P<0.05)、PKM2蛋白表达水平明显下降(P<0.001),PDH蛋白表达水平上升(P<0.01),NLRP3、GSDMD-N、IL-18蛋白表达水平下降(P<0.05),P20、IL-1β蛋白表达水平下降(P<0.01);乳酸含量明显降低(P<0.001);免疫荧光显示HK2阳性表达细胞数显著减少(P<0.001)、NLRP3阳性表达细胞数显著减少(P<0.000 1);各组肺组织IL-1β、IL-18蛋白含量降低(P<0.05).总之,3-BP通过调控有氧糖酵解-细胞焦亡抑制低氧诱导的大鼠PASMCs增殖.