查看更多>>摘要:目的 探讨益生菌通过调节ROS/JNK信号通路在代谢相关脂肪性肝病治疗中的作用和机制.方法 选取18只C57BL/6雄性小鼠,随机分成模型组(n=6)、对照组(n=6)及益生菌组(n=6).给予模型组及益生菌组小鼠MCD饮食来构建代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)小鼠模型,对照组小鼠喂养MCS饮食,益生菌组小鼠以益生菌灌胃,每天灌胃一次,每次0.5 mL,模型组和对照组予以等量生理盐水灌胃,连续灌胃4周.益生菌治疗4周后将小鼠麻醉处死,检测各组小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)、血浆D-乳酸(D-Lac)、血清及小肠二胺氧化酶(DAO)水平变化情况.选取肝脏及回肠组织切片后行HE染色.同时检测各组小鼠肝组织中活性氧(ROS)水平.使用免疫印迹技术检测各组小鼠ROS/JNK信号通路相关蛋白表达情况,如磷酸化c-Jun氨基末端激酶(P-JNK)、B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白(Bax)、紧密连接蛋白ZO-1、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3).使用免疫组化技术检测各组小鼠ROS/JNK信号通路相关蛋白表达情况,如P-JNK、Caspase-3、Bax的表达水平.使用PCR检测各组小鼠Bax、Caspase-3的mRNA表达.结果 肝脏HE染色病理学结果分析:喂养C57BL/6小鼠MCD饮食4周后通过HE染色观察肝小叶结构紊乱,肝细胞内可见脂滴沉积并伴有严重的炎性细胞浸润,证明成功建立MAFLD动物模型.益生菌治疗4周后,与模型组相比,益生菌组小鼠肝小叶结构变得完整,肝细胞内脂肪变性和炎性细胞浸润减少.生化结果分析:C57BL/6小鼠喂养MCD饮食后,模型组小鼠血清中血脂(TC、TG)及转氨酶(ALT、AST)、血浆D-Lac、血清及小肠DAO和肝组织中ROS水平较对照组明显增高.而在使用益生菌治疗4周后,与模型组小鼠相比,益生菌组小鼠的血清TC、TG、ALT、AST、血浆D-Lac、血清及小肠DAO和肝脏中ROS水平均明显下降(P<0.05).Western blot结果分析:C57BL/6小鼠喂养MCD饮食后,与对照组小鼠相比,模型组小鼠肝脏P-JNK、Caspase-3、Bax表达水平明显增加,肠道ZO-1的表达水平明显降低;而使用益生菌治疗4周后,与模型组小鼠相比,益生菌组小鼠肝脏P-JNK、Caspase-3、Bax的表达水平降低,而ZO-1的表达水平增加(P<0.05).PCR结果分析:C57BL/6小鼠喂养MCD饮食后,模型组小鼠Bax、Caspase-3的mRNA表达水平较对照组明显增加;而益生菌治疗后,与模型组相比,益生菌组小鼠Bax、Caspase-3的mRNA表达降低(P<0.05).免疫组化结果分析:C57BL/6小鼠喂养MCD饮食后,模型组小鼠肝脏P-JNK、Caspase-3、Bax的表达水平较对照组升高;在使用益生菌治疗后,与模型组相比,益生菌组小鼠肝脏P-JNK、Caspase-3、Bax的表达水平降低(P<0.05).小肠HE染色病理学结果分析:对照组小鼠的回肠粘膜结构正常,无充血水肿、溃疡、剥脱.与对照组相比,模型组小鼠的回肠粘膜结构严重破坏,肠粘膜出现水肿、溃疡、剥脱现象.使用益生菌干预后,益生菌组小鼠肠粘膜结构变得较为完整,肠粘膜无明显水肿、溃疡、剥脱,见图.相较于对照组,模型组小鼠回肠黏膜Chiu氏病理评分更高.使用益生菌干预后,相较于模型组,益生菌组小鼠回肠黏膜Chiu氏病理评分降低(P<0.05).结论 ROS、P-JNK、Caspase-3、Bax在MAFLD中表达增加,表明其与MAFLD的发病有关.使用益生菌治疗后可以明显改善MAFLD的组织学及血清学相关指标.Western blot、PCR及免疫组化结果都证实益生菌能通过调节ROS/JNK信号通路相关因子表达,减轻氧化应激从而抑制细胞凋亡达到治疗MAFLD的目的.