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畜牧兽医学报
中国畜牧兽医学会
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中国畜牧兽医学会

文杰

月刊

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100193

北京海淀区圆明园西路2号

畜牧兽医学报/Journal Acta Veterinaria Et Zootechnica SinicaCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>本学报是中国畜牧兽医学会主办，《畜牧兽医学报》编委会、中国农业科学院畜牧研究所编辑出版的全国性的畜牧兽医学术刊物。创刊于1956年7月，刊登较高水平的学术论文和企业研究报告以及对生产实践具指导性、启发性的文章。为全国中文核心期刊、中国自然科学核心期刊，并被国内外重要引文数据库及文摘性期刊收录。主要栏目包括畜牧和兽医两大学科。
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    猪MKRN3基因的印记表达和DNA甲基化状态分析

    陈南珠李俊良余大为周心仪...
    3853-3863页
    查看更多>>摘要：旨在探讨MKRN3基因在野生型猪和克隆猪中的印记状态及其DNA甲基化水平.本研究利用西方猪种(杜洛克猪)与本地猪种(巴马猪或荣昌猪)中存在的种间单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP),检测MKRN3基因在3只足月出生0天的野生型杂交猪中的印记状态.利用MethPrimer网站预测MKRN3启动子区附近的CpG岛,并在卵母细胞和精子基因组中验证CpG岛是否为差异甲基化区域(differentially methylated region,DMR).对3只野生型杂交猪和两只克隆猪基因组DNA进行亚硫酸盐转化后测序,检测MKRN3-DMR在野生型猪和克隆猪的甲基化状态,并分析其甲基化状态与基因表达的关系.结果表明,在MKRN3基因的编码区域,西方猪种(杜洛克猪)与本地猪种(巴马猪和荣昌猪)之间存在一个SNP:A/G;RT-PCR测序结果显示,MKRN3在其中1只野生型个体(杜洛克猪与巴马猪杂交后代:DB2)的心脏组织呈双等位基因表达,在肝脏、脾脏、肺等器官和脑组织中均为单等位基因表达,且均表达父本来源的等位基因.MKRN3-DMR在精子中表现为低甲基化(0％),在卵母细胞中表现为高甲基化(70.9％).杂交猪6个组织中的MKRN3-DMR平均甲基化水平分别为:心脏(43.1％)、肝脏(46.2％)、脾脏(48.4％)、肺(45.6％)、肾脏(48.5％)、脑(44.3％);在新生克隆猪的大部分组织中,MKRN3表达父本来源等位基因,MKRN3-DMR甲基化水平与野生型杂交猪相近.而在NT201和NT207脾脏中,其甲基化水平分别为79.0％和80.1％,SNP测序结果也表明在两个克隆猪脾脏中,MKRN3不再维持印记状态,提示克隆猪脾脏组织中MKRN3印记异常.综上所述,MKRN3在野生型猪肝脏、脾脏、肺、肾和脑组织中呈母本印记、父本表达,在心脏为非印记状态;克隆猪部分组织中,MKRN3印记表达和甲基化状态均为异常;启动子的DMR调控MKRN3表达.

    DNA甲基化猪DMR基因组印记

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    miR-127调控绵羊骨骼肌细胞增殖分化及其转录因子PAX3筛选

    贾宇航郭良富张茹楠赵阿勇...
    3864-3875页
    查看更多>>摘要：旨在探究miR-127对绵羊骨骼肌成肌细胞增殖与分化的影响,并通过鉴定miR-127上游核心启动子区域筛选调控其表达的转录因子.本研究以体外分离培养的小尾寒羊胎羊骨骼肌原代成肌细胞为试验材料,过表达或干扰miR-127后,采用RT-qPCR、EdU染色、流式细胞仪分析、免疫荧光染色等方法探究miR-127对绵羊成肌细胞增殖、凋亡和分化的影响.基于生物信息学分析和双荧光素酶报告试验预测并鉴定绵羊miR-127核心启动子区域及其转录因子.结果表明,在绵羊成肌细胞中过表达miR-127后,促进了细胞增殖相关基因PCNA、CDK4的表达(P＜0.01);抑制了细胞凋亡相关基因Caspase3、BAX的表达(P＜0.05);EdU结果显示,绵羊成肌细胞中过表达miR-127后,细胞阳性率显著提升(P＜0.05);流式细胞仪分析显示,miR-127过表达可显著增加成肌细胞S期和G2期细胞比例并减少成肌细胞的凋亡.在细胞分化试验中,过表达miR-127显著增加了成肌细胞分化相关基因MYOD1和MYHC mRNA的表达水平(P＜0.05),显著增加了 MYHC的阳性肌管面积(P＜0.05).抑制miR-127 表达则出现与上述相反的结果.为进一步揭示调控miR-127表达的调控因子,双荧光素酶活性检测结果显示,miR-127上游1 500～1 800 bp(miR-127-P6)区段活性最高,推断其为miR-127的核心启动子区.生物信息学预测表明,在miR-127核心启动子区存在一个与转录因子PAX3的结合位点.在绵羊成肌细胞中过表达转录因子PAX3后,miR-127启动子活性和miR-127的表达均极显著增加(P＜0.01).本研究表明,绵羊miR-127显著促进绵羊骨骼肌成肌细胞增殖分化,减少了成肌细胞凋亡,进而参与骨骼肌成肌细胞的发育过程;进一步研究发现,绵羊miR-127上游的1 500～1 800 bp是其核心启动子区,转录因子PAX3正向调节miR-127的转录.本研究为进一步探究绵羊肌肉生长发育性状的分子机制提供了理论参考.

    绵羊成肌细胞增殖分化miR-127转录因子PAX3

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    基于重测序数据评估南阳牛保种效果

    刘思宇张曼张岩魏稚彤...
    3876-3886页
    查看更多>>摘要：旨在通过遗传多样性和群体结构分析,评估南阳牛的保种效果.本研究基于30头健康南阳牛的全基因组重测序数据,通过变异检测获得单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)信息,综合分析群体遗传多样性、群体结构、亲缘关系以及连续纯和片段(ROH)分布特征,对南阳牛保种群的保种效果进行全面评估.结果显示:1)共检测到高质量SNPs位点数目是25 929 389个;2)保种群遗传多样性丰富,核苷酸多样性为0.002 9,多态性标记比例为0.888 7,最小等位基因频率为0.186 1,期望杂合度为0.274 9,观测杂合度为0.255 7;3)世代有效群体含量在1 000代前为2 834头,在20代前为149头,呈逐年下降趋势;4)主成分分析结果显示南阳牛保种群没有明显分层;5)个体间的遗传距离介于0.80～0.89,平均遗传距离为0.83±0.02;6)30头南阳牛个体共分为7个家系,公牛可分为5个家系;7)共检测到ROH片段数目是4 992个,平均每头南阳牛的ROH片段长度为约74.41 Mb,总长度为2.18 Gb,基于ROH的平均近交系数为0.031,0.5 Mb以下的ROH片段占比最多为75.72％,2～4 Mb的ROH片段占比最少为0.16％.综上所述,南阳牛保种群体遗传多样性丰富,没有出现明显分层,近交水平较低,但仍有个别个体近交较高.因此,未来的保种工作应加强选种和选配管理,以促进群体的可持续发展.

    南阳牛全基因组重测序遗传多样性群体结构保种

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    槲皮素抑制自噬恢复LTA诱导的奶牛乳腺上皮细胞紧密连接功能

    李相辰王林楠于正青张莉...
    3887-3896页
    查看更多>>摘要：旨在探究槲皮素(quercetin)修复脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(mammary alveolar cells-large T antigen,MAC-T)紧密连接损伤的作用机制.本试验以MAC-T为研究对象,设置不同浓度的LTA组(0、0.1、1、10 μg·mL-1)、不同浓度的槲皮素组(0、5、10、20 μmol·L-1)、空白组,检测不同浓度LTA和槲皮素对MAC-T细胞活力的影响.设置对照组(不做任何处理)、低、中、高浓度LTA组(0.1、1、10 μg·mL-1),筛选LTA最佳作用浓度;设置对照组(不做任何处理)、高浓度LTA+低浓度槲皮素(5 µmol·L-1)、高浓度LTA+中浓度槲皮素组(10 μmol·L-1)、高浓度LTA+高浓度槲皮素组(20 μmo1·L-1),筛选槲皮素最佳作用浓度.在自噬与紧密连接关系的研究中,将细胞分为对照组(不做任何处理)、高浓度LTA组、高浓度LTA+中浓度槲皮素组、高浓度LTA+自噬抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)组(50 μmol·L-1).每组均进行3次重复,槲皮素与氯喹均在LTA作用前加入,即使用槲皮素和氯喹分别孵育细胞3 h后,再加入10μg·mL-1LTA继续培养12 h,通过CCK-8法检测不同浓度LTA和槲皮素对MAC-T活力的影响,利用Western blot和免疫荧光检测细胞紧密连接蛋白(Occludin、ZO-1、Claudin-1)和自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3、P62)的表达水平.结果显示,中、高浓度LTA对MAC-T活力有显著影响,但细胞活性维持在90％以上,不同浓度槲皮素对MAC-T活力均无显著影响.此外,LTA诱导后的MAC-T中紧密连接蛋白表达降低,自噬水平升高;槲皮素作用MAC-T后,细胞紧密连接蛋白表达升高,自噬水平降低;自噬抑制剂CQ作用后,自噬水平被抑制,紧密连接蛋白表达升高.LTA可导致MAC-T自噬过度激活,破坏紧密连接功能,而槲皮素可通过抑制自噬恢复紧密连接功能.该研究结果为奶牛乳腺炎的治疗提供了新的研究思路和理论依据.

    槲皮素奶牛乳腺上皮细胞脂磷壁酸自噬紧密连接

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    HDLBP通过调控氧化应激水平和炎性因子表达参与鹅肥肝的形成

    袁紫金王婉昕邢娅李家惠...
    3897-3913页
    查看更多>>摘要：旨在利用活体与细胞模型探究高密度脂蛋白结合蛋白(HDLBP)的亚细胞分布、基因功能及其与鹅肥肝形成的关系.本研究选取70日龄健康朗德鹅公鹅14只,单笼饲养,随机均分为对照组(平均体重为3.71 kg,自由采食)和试验组(平均体重为3.72 kg,填饲20 d)进行活体模型试验.从23日龄朗德鹅胚胎中分离肝细胞并过表达HDLBP基因进行细胞模型试验.首先采用免疫印迹法、免疫荧光技术对鹅原代肝细胞中HDLBP蛋白质进行亚细胞定位分析,其次采用免疫印迹法检测填饲鹅和对照鹅肝脏全细胞HDLBP(wHDLBP)及线粒体中HDLBP(mHDLBP)的蛋白质丰度,然后在鹅原代肝细胞中过表达HDLBP,检测其对细胞中mHDLBP蛋白质丰度、丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、活性氧类物质(ROS)和线粒体膜电位水平的影响,最后通过转录组测序分析筛选HDLBP过表达影响的差异表达基因与相关信号通路,并在活体模型中对部分差异表达基因进行定量PCR验证.结果表明:HDLBP可结合到线粒体中;填饲组wHDLBP和mHDLBP蛋白质丰度均显著低于对照组(P＜0.01);在鹅原代肝细胞中过表达HDLBP显著增加mHDLBP的蛋白质丰度(P＜0.05),增加MDA(P＜0.01)和ROS(P＜0.05)含量,降低线粒体膜电位(P＜0.05)及T-SOD(P＜0.05)和GSH-PX(P＜0.05)活性;HDLBP过表达所影响的上调差异表达基因主要富集于免疫/炎症相关通路.此外,相对于对照组,填饲组中炎症相关基因IL1R1、TNFSF10、LTC4S、NCF1、SFTPA1及KDR的表达可能受到HDLBP的调控而显著减少(P＜0.05,0.01或0.001).HDLBP能够与线粒体结合,填饲显著降低鹅肝全细胞和线粒体样中HDLBP的蛋白水平,过表达HDLBP导致线粒体功能损伤、氧化应激和炎性因子的表达增强,因此HDLBP可能通过影响线粒体功能、调控氧化应激和炎症反应为鹅肥肝提供保护.

    鹅肥肝HDLBP线粒体氧化应激炎症

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    狮头鹅群体遗传多样性和体重体尺全基因组关联分析

    黄红艳张力允黄智荣伍仲平...
    3914-3924页
    查看更多>>摘要：旨在探究狮头鹅群体遗传多样性和体重体尺性状全基因关联分析.本试验随机选取2年龄休产状态的狮头鹅111只(公鹅20、母鹅91只),进行体重和体尺指标表型测定和二代基因组测序(5×),对测序数据进行SNPs位点检测,计算狮头鹅群体遗传多样性指标,利用单标记回归混合模型开展SNPs与体重体尺性状的关联分析.本试验采用Bonferroni法校正,即全基因组水平阈值(0.05/总SNPs)和染色体水平阈值(0.05/染色体SNP数目),确定显著性SNPs位点,并对染色体水平显著性SNPs位点上、下游50 kb进行基因注释.经过质控,共计获得7 577 552个有效SNPs用于进一步分析.群体多样性分析显示,历史有效群体含量、最小等位基因频率、多态信息含量、观察杂合度、期望杂合度和近交系数分别为234、0.25、0.34、0.26、0.34和0.22.共检测出6 164个连续纯合片段,长度在1.0～2.0 Mb的纯合片段占比最多(74.4％).体重体尺性状的全基因组关联分析发现38个染色体水平显著性SNPs,涉及90个基因.其中影响生长发育相关的基因有7个,即D2HDH、THAP4、ESPNL、EPT1、TNPO3、MCF2L、AIP1.本研究利用二代基因组测序数据发现,狮头鹅群体存在一定程度近交现象,挖掘出与狮头鹅体重和体尺性状相关的7个候选基因,可为后续狮头鹅群体保种、功能基因研究和分子育种开展提供重要参考.

    狮头鹅群体多样性体重体尺性状全基因组关联分析

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    基于SNP位点的吉林梅花鹿分子系谱构建及群体遗传结构分析

    范广轩王天骄董依萌王洪亮...
    3925-3935页
    查看更多>>摘要：旨在利用全基因重测序技术获得的SNP位点为吉林梅花鹿保种群构建分子系谱,并对其遗传结构进行分析.本研究在锯茸期采集保种群的吉林梅花鹿血液10 mL(n=425),其中成年公鹿132只、成年母鹿208只、仔鹿85只,提取DNA后进行全基因重测序.通过计算血源同源系数(IBD)分析吉林梅花鹿亲缘关系;基于观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)、多态信息含量(PIC)、系统发育树和群体分化指数(Fsf)等对吉林梅花鹿保种群遗传结构进行分析.通过全基因重测序筛选出25 548 601个高质量SNPs,425个样本共组成了 90 100对亲缘关系,平均亲缘系数为0.435 1,得出195对父子关系与143对母子关系,占到采样群体原始系谱记录的92％,检出原始系谱错误率为2.2％,纠正了原始记录错误8处,具有较高的准确性和可靠性;分析群体分化指数(Fst),东丰型吉林梅花鹿与伊通型距离较远;绘制系统发育树,将吉林梅花鹿保种群划分为17个家系;采用的SNP标记平均观测杂合度为0.456,平均期望杂合度为0.277,平均多态信息含量为0.627,吉林梅花鹿保种群平均近交系数为0.078,存在较弱的近交.本研究建立了吉林梅花鹿保种群的分子系谱并对其群体遗传结构进行了分析,这对于保护吉林梅花鹿遗传多样性和规划保种群后续选育计划至关重要.

    吉林梅花鹿SNP分子系谱

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    基于Smart-seq2探究玻璃化冷冻对猪孤雌激活囊胚基因表达的影响

    杨柏高龙熙张亮徐皆欢...
    3936-3946页
    查看更多>>摘要：旨在探究玻璃化冷冻对猪孤雌激活(parthenogenetic activation,PA)囊胚基因表达的影响.本研究以猪PA囊胚为研究对象,根据试验处理分为新鲜组、玻璃化冷冻组Ⅰ和玻璃化冷冻组Ⅱ,随后从每组挑选3枚形态良好的囊胚,利用Smart-seq2单细胞全长转录组测序技术进行转录组测序分析.结果显示,玻璃化冷冻组Ⅰ与新鲜组相比,共鉴定到772个差异表达基因(differential expression genes,DEGs),GO和KEGG富集分析结果显示,这些DEGs与细胞脂质代谢过程、细胞葡萄糖稳态、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路等相关;玻璃化冷冻组Ⅱ与新鲜组相比,共鉴定到1 613个DEGs,主要与糖异生、代谢途径、氨基酸生物合成等相关;玻璃化冷冻组Ⅱ与玻璃化冷冻组Ⅰ相比,鉴定到822个DEGs,主要与丙酮酸代谢过程、N-聚糖生物合成、细胞衰老等相关.综上,本研究基于Smart-seq2单细胞全长转录组测序技术揭示了玻璃化冷冻对猪PA囊胚脂质代谢、能量代谢、MAPK信号通路等相关基因表达的影响.

    Smart-seq2玻璃化冷冻猪孤雌激活囊胚

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    FKBP5基因对绵羊卵泡颗粒细胞功能的影响

    古丽米热·阿布都热依木张欣如吴阳升陈莹...
    3947-3956页
    查看更多>>摘要：旨在探讨FKBP5在绵羊卵巢颗粒细胞(GCs)中的潜在功能.本研究从乌鲁木齐市华凌屠宰场的20个2岁左右处于性成熟阶段的阿勒泰羊卵巢中分离GCs.将试验分为4组:GC(空白对照)、GC+NC(转染siRNA-NC)、GC+siFKBP5(转染 siRNA-FKBP5)、GC+siFKBP5+LH(促黄体生成素处理转染 siRNA-FKBP5).利用细胞免疫荧光检测FKBP5蛋白在GCs中的定位.通过EdU、Tunel和Western blot检测其对细胞增殖、凋亡的影响;通过Western blot检测其对AKT和ERK信号通路的影响;通过ELISA检测其对E2、P4水平的影响.结果表明,FKBP5表达于GCs细胞质中.FKBP5表达量随着LH浓度不断升高;5 IU·mL-1 LH作用4 h,FKBP5表达较高(P＜0.001).干扰FKBP5后显著抑制了细胞增殖,并显著降低PCNA蛋白表达量(P＜0.001);显著促进了细胞凋亡,增加了 BAX的表达并减少了 Bcl-2的表达(P＜0.001);显著抑制了 GCs中AKT和ERK信号通路的激活以及E2和P4的分泌(P＜0.001).LH处理部分改善了干扰FKBP5对GCs的影响(P＜0.05).本研究结果表明,FKBP5影响绵羊GCs的增殖、凋亡、AKT和ERK信号通路以及E2和P4的分泌,其功能受LH的影响.这些结果为进一步研究FKBP5在绵羊卵泡发育中的作用提供了理论依据.

    FKBP5颗粒细胞细胞增殖凋亡AKT和ERK信号通路类固醇

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    不同FecB基因型和不同直径绵羊卵泡中BMP/SMAD通路活性及蛋白表达差异

    龚一鸣贾一轩李佳骏王翔宇...
    3957-3967页
    查看更多>>摘要：旨在探究不同FecB基因型对绵羊卵泡中BMP/SMAD通路活性和蛋白表达的影响;揭示成熟大卵泡和小卵泡之间BMP/SMAD通路活性和蛋白表达的差异.本研究采用TaqMan分型方法筛选出不同FecB基因型的母羊,同期发情后取卵泡期成熟卵泡和黄体期卵巢表面小卵泡,利用免疫印迹法(Western blot)测定BMP/SMAD通路相关蛋白表达水平和通路活性.结果表明,对于小卵泡组,FecB突变型卵泡中骨形态发生蛋白1B型受体(bone morphogenetic protein receptor type 1B,BMPR1B)表达量显著高于野生型卵泡(P＜0.05),但 SMAD 家族成员4(SMAD family member 4,SMAD4)表达量和SMAD1/5/9的磷酸化水平显著低于野生型卵泡(P＜0.05);对于成熟大卵泡组,FecB突变型卵泡中FKBP脯氨酰异构酶1A(FKBP prolyl isomerase 1A,FKBP1A)和SMAD4表达量显著低于野生型卵泡(P＜0.05),Ⅰ型受体(BMPR1B)和Ⅱ型受体(BMPR2)的蛋白表达量及SMAD1/5/9的磷酸化水平在两种基因型之间未显示出显著差异.另一方面,对比FecB突变型小卵泡和成熟大卵泡发现:成熟大卵泡中BMPR1B和SMAD4蛋白表达量和SMAD1/5/9磷酸化程度显著高于小卵泡(P＜0.05).上述结果表明,由于SMAD4表达量的下降,FecB突变型大、小卵泡中结合到基因组靶区域的SMAD4-SMAD1/5/9蛋白复合物均相对较少,将导致通路活性降低,而且由于小卵泡中较低的SMAD1/5/9磷酸化水平,其通路活性更低.另外,绵羊突变型卵泡生长发育成熟后BMP/SMAD通路活性显著增强.

    绵羊FecB突变卵泡BMP/SMAD通路SMAD4

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