查看更多>>摘要:目的:探究黏附性双歧杆菌对小鼠便秘的缓解作用及对小鼠肠道菌群及肠道形态的影响.方法:检测14株双歧杆菌黏附性.50只小鼠随机分为对照组、模型组、阳性药物组、低黏附性组与高黏附性组,每组10只.对照组、模型组接受0.2 ml无菌双蒸水灌胃,阳性药物组接受0.2 ml 1.52 mg/kg乳果糖水溶液灌胃,低黏附性组、高黏附性组接受0.2 ml 109 CFU/ml对应双歧杆菌水溶液灌胃,1 d/次,连续37 d.从第31天开始建立便秘模型,除对照组外其余4组额外接受0.2 ml 10 mg/(kg·bw)盐酸洛哌丁胺无菌水溶液灌胃,1 d/次,连续7 d.造模结束后每只小鼠再接受0.2 ml活性炭混悬液灌胃,测定首粒黑便排出时间.禁食12 h后接受无菌双蒸水或盐酸洛哌丁胺灌胃,1 h后接受0.2 ml活性炭混悬液灌胃,30 min后处死所有小鼠,测量肠道全长与活性炭混悬液在肠内推进的距离,计算小肠推进率.收集第30天、第36天小鼠4 h内排出的新鲜粪便,测定粪便含水率与短链脂肪酸(SCFAs)含量.HE染色观察小肠组织形态,免疫荧光检测闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭锁蛋白Occludin表达情况,qRT-PCR检测水通道蛋白、c-kit及血清素相关基因转录水平,ELISA检测5-羟色胺(5-HT)、IL-1β、TNF-α水平、16S rRNA高通量测序检测肠道菌群相对含量.结果:选择CCFM 622、CCFM 624、CCFM 626、CCFM 641、CCFM 642配成低黏附性组使用的菌组,CCFM 16、CCFM 625、CCFM 643、CCFM 666、CCFM 668配成高黏附性组使用的菌组.与对照组相比,模型组、阳性药物组、低黏附性组、高黏附性组首粒黑便排出时间、AQP4、AQP8 mRNA、5-HT、IL-1β、TNF-α水平升高(P<0.05),小肠推进率、粪便含水率、ZO-1、Occludin荧光强度、c-kit、5-HT4R、Tph1 mRNA、乙酸、丙酸、丁酸水平降低(P<0.05).与模型组相比,阳性药物组、低黏附性组、高黏附性组首粒黑便排出时间、AQP4、AQP8 mRNA、5-HT、IL-1β、TNF-α水平降低(P<0.05),小肠推进率、粪便含水率、ZO-1、Occludin荧光强度、c-kit、5-HT4R、Tph1 mRNA、乙酸、丙酸、丁酸水平升高(P<0.05).与阳性药物组、高黏附性组相比,低黏附性组首粒黑便排出时间、AQP4、AQP8 mRNA、5-HT、IL-1β、TNF-α水平升高(P<0.05),小肠推进率、粪便含水率、ZO-1、Oc-cludin荧光强度、c-kit、5-HT4R、Tph1 mRNA、乙酸、丙酸、丁酸水平降低(P<0.05).对照组黏膜结构完整,小肠绒毛整齐均匀,无损伤或皱褶,细胞结构完整;模型组小肠绒毛严重破裂萎缩,杯状细胞不完整;与模型组相比,阳性药物组、低黏附性组、高黏附性组小肠绒毛形态有所改善,杯状细胞数量有所增加,阳性药物组与高黏附性组小肠绒毛形态改善程度较低黏附性组更为明显.与对照组相比,模型组Shannon指数、Firmicutes/Bacteroidetes(F to B)比率下降(P<0.05),属水平存在差异(P<0.05);与模型组相比,阳性药物组、低黏附性组、高黏附性组Shannon指数、F to B比率升高(P<0.05).模型组与对照组、阳性药物组、低黏附性组、高黏附性组样本点可以区分,但对照组、阳性药物组、低黏附性组、高黏附性组样本点重合度较高.结论:双歧杆菌能够调节便秘小鼠肠道菌群,提升肠道运转效率,保护肠道黏液屏障,具有高黏附性的双歧杆菌对小鼠便秘的缓解效果优于低黏附性的双歧杆菌.