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中国生物制品学杂志
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封多佳

月刊

1004-5503

zgsw1988@163.com

0431-87923344；87910140

130062

长春市西安大路3456号

中国生物制品学杂志/Journal Chinese Journal of BiologicalsCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>《中国生物制品学杂志》为中华预防医学会系列杂志，国家卫生部主管，国内外公开发行。本刊为报道我国生物制品研究开发重大成果和国内外最新进展的国内唯一的生物制品专业学术期刊。本刊主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域，如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床医学等方面的研究、生产、使用和质控等学术文章。在选择来稿时注重学术性、前沿性和实用性。优先报道基金项目及各种基金赞助课题的文章，并适当照顾边远地区和基层单位。本刊可承接国内外与生物制品及生物技术产品有关的设备、试剂广告业务，以刊物所具有的最广泛和最有效的传播能力做好客户的产品宣传。
正式出版
收录年代

    良好工程实践在狂犬病疫苗工程项目中的应用

    高恩鹏崔行义邱野刘晓东...
    513-518,526页
    查看更多>>摘要：良好工程实践(Good Engineering Practice,GEP)是以保证产品质量、患者安全、药品生产质量管理规范(Good Manufacturing Practice of Medical Products,GMP)为目的,专用于制药工程项目的实践.本文基于长春生物制品研究所有限责任公司(简称长春所)现有管理体系及生物制药工程与国际工程项目管理模式,结合GEP技术特点,从用户需求(User Requirement Specification,URS)、计划、设计、变更、质量、移交等关键控制点入手,总结长春所GEP体系建设及其在狂犬病疫苗工程项目中的应用,为疫苗工程项目在风险管理、组织和控制、成本管理及创新和持续改进方面提供技术支持与理论依据.

    良好工程实践生物制药工程风险管理组织和控制成本管理创新和持续改进

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    重组腺相关病毒9型空壳率阴离子交换高效液相色谱检测方法的建立及验证

    史新昌王凤阳刘亚辉周勇...
    519-526页
    查看更多>>摘要：目的 建立检测重组腺相关病毒9型(recombinant adeno-associated virus type 9,rAAV9)空壳率的阴离子交换高效液相色谱(anion-exchange high-performance liquid chromatography,AEX-HPLC)法,并进行验证.方法 采用基于电荷差异的AEX-HPLC法,通过对流动相洗脱梯度、流动相pH、色谱柱柱温、流速、样品浓度、进样体积和荧光检测器检测波长进行优化,建立检测rAAV9空壳与实心病毒比例的方法,并对方法的专属性、线性、检测限、定量限、精密度和准确度进行验证,确认方法可行性.结果 利用CIMac AAV full/empty-0.1 mL分析柱,以20 mmol/L 1,3-二[三(羟甲基)甲氨基]丙烷(BIS-Tris propane,BTP)为流动相A,20 mmol/L BTP+1 mol/LNaCl为流动相B进行梯度洗脱,流动相pH均为9.0,柱温20 ℃,流速1 mL/min,样品浓度4 × 1012 vg/mL,进样体积10 µL,激发波长为280 nm,发射波长为330 nm,可实现rAAV9空壳与实心病毒的基线分离及定量检测.方法 验证结果表明,制剂缓冲液无干扰,专属性较好;rAAV9在(1.6～8)× 1012vg/mL范围内线性关系良好,r=0.993;检测限为5× 1010vg/mL,定量限为1 × 1011vg/mL;重复性和中间精密度RSD分别为2.95％和2.10％;准确率均不低于80％.结论 建立了一种高灵敏度且可快速检测rAAV9空壳与实心病毒比例的AEX-HPLC法,可用于基因治疗产品空壳率的分析及质量控制.

    重组腺相关病毒基因治疗阴离子交换高效液相色谱法空壳病毒实心病毒质量控制

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    重组腺相关病毒中游离与错误包装宿主细胞DNA检测的两种前处理方法的比较

    王光裕胡倩史新昌闫书美...
    527-531页
    查看更多>>摘要：目的 采用DNA酶(deoxyribonuclease,DNase)处理与填料亲和两种前处理方法检测重组腺相关病毒(recombi-nant adeno-associated virus,rAAV)游离与错误包装宿主细胞DNA(host cell DNA,HCDNA)残留量,并进行比较.方法 分别采用DNase处理法和填料亲和法分离游离与错误包装HCDNA,再进行核酸提取及qPCR检测.比较两种前处理方法检测HCDNA残留量的准确度和重复性.结果 采用DNase处理的方式,DNase未处理组核酸定量检测结果为HCDNA总残留量,DNase处理组为错误包装HCDNA量,二者差值为游离HCDNA残留量.DNase未处理和处理组回收率均为75％以上,重复性RSD小于30％.采用亲和提取方式,填料偶联亲和配基,结合rAAV,检测错误包装HCDNA回收率为75％以上,检测游离HCDNA回收率仅为36％.结论 DNase处理法可有效检出游离与错误包装HCDNA,可为后续研究奠定基础.

    腺相关病毒DNA酶亲和填料PCR宿主细胞DNA游离错误包装

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    生物反应器微载体Vero细胞罐外消化放大培养对狂犬病病毒CTN-1V株产毒能力的影响

    杨敏宋远涛王玲徐晓...
    532-536页
    查看更多>>摘要：目的 探讨微载体Vero细胞从30 L生物反应器经罐外细胞消化放大培养至300 L生物反应器对狂犬病病毒(rabies virus,RABV)CTN-1 V株产毒能力的影响.方法 将第140代Vero细胞于37 ℃培养72～120h后,按1∶4的细胞密度比传代扩增至10层细胞工厂,继续培养72～120 h;将单层致密细胞消化后接种至30 L生物反应器,微载体7～10g/L,培养温度 37 ℃,pH(7.0～7.4),溶氧 30％～80％,搅拌速度 10～50 r/min,连续灌流培养 72～120h,共培养3批;微载体Vero细胞经罐外细胞消化后放大培养至300 L生物反应器,微载体5～8g/L,培养温度37 ℃,pH(7.0～7.4),溶氧 30％～80％,搅拌速度 30～80 r/min,灌流培养72～120 h;按 MOI=0.05接种 RABV CTN-1 Ⅴ株,每24 h收获病毒液1次,检测病毒滴度和抗原含量.结果 30 L生物反应器微载体Vero细胞培养96 h后密度约为1 × 107个/mL;300 L生物反应器微载体Vero细胞培养96 h后密度约为7.4 × 106个/mL.病毒接种96 h达峰值,病毒平均滴度为6.8 lgLD50/mL,抗原平均含量为2.58 IU/mL.结论 微载体Vero细胞从30 L生物反应器经罐外细胞消化放大培养至300 L生物反应器的工艺稳定可行,对RABV CTN-1V株的产毒能力影响较小,可为RABV灭活疫苗大规模生产提供参考资料.

    狂犬病病毒Vero细胞生物反应器微载体罐外消化放大培养

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    云南省1株柯萨奇病毒A组8型分离株全基因组分析

    郭伟刘煜菡张名冯昌增...
    537-543页
    查看更多>>摘要：目的 分析柯萨奇病毒A组8型(Coxsackievirus A8,CVA8)云南分离株A8-1/YN/CHN/2019全基因组序列及其遗传特性,以期了解CVA8的流行和变异情况.方法 设计针对CVA8的引物,提取病毒RNA,RT-PCR扩增VP1序列并测序,BioEdit 7.2.3拼接得到全基因组,使用MEGA 7.0软件进行系统进化分析,应用Simplot 3.5.1及RDP4软件进行重组分析.结果 A8-1/YN/CHN/2019株长7 396 nt,编码2 188个氨基酸.其VP1与CVA8原型株AF081299/Donovan/USA/1998核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为81.04％和95.24％;A8-1/YN/CHN/2019株属于基因型E,其他中国分离株位于D和E型.重组分析发现A8-1/YN/CHN/2019株在非结构编码区的P2和P3段上发生重组.结论 A8-1/YN/CHN/2019株为E基因型,并在P2、P3段的非结构区发生了重组事件.

    柯萨奇病毒A组8型全基因组测序重组分析

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    甲基化转移酶3对食管癌细胞增殖、迁移及谷氨酰胺代谢的影响

    高川力周锡邹江杨密渊...
    544-553,558页
    查看更多>>摘要：目的 探讨甲基化转移酶3(methyltransferase like-3,METTL3)在食管癌中的表达及其对细胞增殖、凋亡、迁移和谷氨酰胺代谢的影响.方法 采用qRT-PCR、Western blot和免疫组化法检测食管癌组织及其癌旁组织中METTL3基因的表达;CCK8试验、克隆形成试验、划痕试验和Transwell试验检测METTL3抑制剂STM2457对人食管鳞状癌细胞系Eca1 09和KYSE150增殖及迁移的影响;流式细胞术、TUNEL染色试验检测其对细胞周期及凋亡的影响;TMT/iTRAQ定量蛋白质组法分析其对下游相关信号通路的影响;谷氨酰胺和谷氨酸检测试验及Western blot法分析其对食管癌细胞谷氨酰胺代谢的影响.结果 METTL3在食管癌组织中的表达显著上调(t=5.024,P＜0.000 1).STM2457抑制Eca109和KYSE150细胞的METTL3表达后,显著抑制了细胞的增殖及迁移能力,细胞周期在G0/G1期发生阻滞,细胞凋亡率增加,同时降低了谷氨酰胺摄取量和谷氨酸生成量,并下调了谷氨酰胺代谢相关蛋白丙氨酸-丝氨酸-半胱氨酸转运载体2(alanine-serine-cysteine transporter 2,ASCT2)、谷氨酰胺酶(glutaminase,GLS)和谷氨酸脱氢酶1(glutamate dehydrogenase 1,GLUD1)的表达.METTL3敲低后,Eca109和KYSE150细胞中谷氨酰胺摄取量和谷氨酸生成量显著降低(谷氨酰胺摄取量:t为24.52～41.01,P均＜0.01;谷氨酸生成量:t为8.431～11.83,P均＜0.01);METTL3过表达后,Eca109和KYSE150细胞中谷氨酰胺摄取量和谷氨酸生成量显著升高(谷氨酰胺摄取量:t分别为5.803和56.13,P均＜0.01;谷氨酸生成量:t分别为11.06和4.695;P均＜0.01).METTL3敲低后,Eca109和KYSE150细胞中谷氨酰胺代谢相关蛋白ASCT2、GLS和GLUD1表达水平显著下调,而METTL3过表达后,ASCT2、GLS和GLUD1蛋白表达水平显著上调.结论 METTL3在食管癌中高表达,并可能通过介导食管癌细胞谷氨酰胺代谢促进细胞增殖.

    食管癌甲基化转移酶3STM2457谷氨酰胺代谢

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    2020-2021年庄河市甲型肝炎病毒流行株基因组特征分析

    邵玉平任丽萍王艳孙静...
    554-558页
    查看更多>>摘要：目的 分析2020-2021年庄河市环境污水中甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)基因组特征,比较其与病例标本HAV基因组相似性.方法 收集2021年庄河市7-12月18份污水处理厂进水口污水样本(环境污水),提取病毒RNA,逆转录后采用巢式PCR对VP1-2A区进行扩增,测序拼接获得5条HAV核苷酸序列(321 bp).使用生物信息学软件进行系统进化分析.结果 2021年环境污水样本HAV均为Ⅰ A亚型,VP1-2A区核苷酸序列同源性为98.7％～100％.与2020年庄河市甲肝病例样本的核苷酸序列同源性为97.8％～100％,进化上分为2个分支.结论 Ⅰ A亚型为庄河市环境污水HAV的优势基因型,与病例样本的基因组存在差异,也有部分毒株的基因组完全一致.通过比较环境污水中HAV核酸与病例样本核酸的相似性,可更好地了解HAV的循环,以便对甲肝的流行病学监测作出早期预警.

    甲型肝炎病毒分子流行病学环境污水

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    双瓶选择饮酒致酒精依赖小鼠海马中长链非编码RNA的表达谱分析

    薛琳媛武南南封芮芮赵欣...
    559-565页
    查看更多>>摘要：目的 对双瓶选择饮酒致酒精依赖小鼠海马中的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)表达谱进行分析.方法 通过双瓶选择饮酒法建立酒精依赖小鼠模型,同时设对照组(饮水).选取酒精组酒精偏好率＞60％且酒精饮用量＞10 g/(kg·24 h)的雄性小鼠3只,随机抽取对照组雄性小鼠3只,分离双侧海马脑组织,液氮保存.采用Agilent084388芯片对小鼠海马脑组织RNA样本lncRNA和mRNA进行测序分析,lncRNA表达谱芯片(ncRNA microarray)检测样本中lncRNA的差异表达情况.基因功能(Gene Ontology,GO)和信号通路数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析差异表达lncRNA可能涉及的生物学过程及参与的信号通路.Pearson相关分析预测与每个差异表达lncRNA共表达的编码基因,超几何分布检验法计算每个对应转录因子条目中差异基因富集的显著性,Cytoscape软件绘制可视化网络图.结果 与对照组比较,酒精组小鼠海马组织差异表达的lncRNA共855个(FC ≥ 2.0,P＜0.05),337个显著上调,上调幅度最大的为NONMMUT025786.2和NONMMUT072246.2;518个显著下调,下调幅度最大的为NONMMUT113098.1和NONMMUT076455.1.两组小鼠差异表达mRNA共361个(FC ≥ 2.0,P＜0.05),271个显著上调,Upf3b和Zfp943上调幅度最大;90个显著下调,Adamts13和Ift27下调幅度最大.差异表达的lncRNA以细胞表面正向调控、GTP酶活性、细胞囊泡运输差异最明显;其主要参与的信号通路有丙酸酯代谢通路、牛磺酸代谢通路、细胞外基质受体和AMPK信号通路.最富集的转录因子为FOXL1和LHX3,分别有25和21个对应共表达基因.结论 通过高通量基因表达谱芯片分析,获得了lncRNA和mRNA可能的关键调控位点.本研究为海马脑区酒精依赖相关分子机制的研究提供了实验依据.

    长链非编码RNA酒精依赖海马双瓶选择饮酒基因芯片

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    流感病毒球状头部结构域HA1的原核表达及纯化

    曾博宇许智强于潼陈璐儿...
    566-570,592页
    查看更多>>摘要：目的 原核表达流感病毒(influenza virus,IV)球状头部结构域HA1基因,优化其诱导表达条件,并进行蛋白纯化,以期获得具有良好免疫原性的IV HA1蛋白.方法 将Influenza A virus[A/Saratov/CRIE-250/2017(H3N2)]、Influenza A virus[A/Hebei/F076/2018(mixed)]和Influenza A virus[A/USA/LAN_(P5)_HA/2018(H1N1)]进行截短,取63-286头状结构域氨基酸序列,按照大肠埃希菌常用密码子进行优化,合成基因命名为17Sa、Hebei和US4,并对基因17Sa进行点突变命名为基因17Sa变.将4个基因分别克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组质粒,将重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,优化蛋白表达条件,并利用His标签镍离子蛋白纯化柱纯化蛋白.结果 成功插入长度为762 bp的目的基因,重组质粒经双酶切(NheⅠ/XhoⅠ)鉴定构建正确.表达的重组蛋白USA相对分子质量约为26 000,17Sa、p17Sa和Hebei相对分子质量约为28 000,均可与鼠抗His抗体特异性结合.重组蛋白均以包涵体形式表达,在诱导温度37 ℃,诱导8 h表达量最高.纯化的重组蛋白17Sa、17Sa变、Hebei和USA纯度分别为90％、85％、95％和80％.结论 通过原核表达系统成功表达并纯化了目的蛋白,该蛋白具有良好的反应原性,为流感抗体检测和新型疫苗的开发奠定了基础.

    流感病毒HA1原核表达纯化

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    携带白细胞介素-2/肝细胞生长因子4-kringle拮抗剂双基因的减毒沙门菌对小鼠免疫功能的影响

    杨志华蒋如如牛廷献郭晓宇...
    571-576页
    查看更多>>摘要：目的 研究携带白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)/肝细胞生长因子4-kringle拮抗剂(4-kringle antagonist of hepatocyte growth factor,NK4)双基因的减毒沙门菌(Ty21a-pIRES-IL-2-NK4,命名为TPIN)对小鼠体液及细胞免疫功能的影响.方法 将18只BALB/c小鼠(雌雄各半)随机分为对照(胃管饲服1.5 mL 10％NaHCO3)、Ty21a(胃管饲服0.1 mLTy21a)、TPIN(胃管饲服0.1mLTPIN)组,6只/组.初次免疫7d后加强免疫,共2次,给药第21天,经眼球采血分离血清,ELISA法检测血清IgG抗体水平;无菌分离小鼠胸腺和脾脏,体外分别用Ty21a、TPIN刺激培养的小鼠脾细胞,72 h后,CCK-8法检测小鼠脾细胞增殖能力,ELISA法检测小鼠脾细胞细胞因子表达水平;称重小鼠脾脏和胸腺,计算脾和胸腺指数,并进行脾和胸腺组织HE染色.结果 与对照和Ty21a组相比,TP1N组小鼠血清IgG水平(F=111.74,P＜0.01)以及脾细胞上清IFNγ、IL-4和IL-10含量均明显升高(F分别为38.21、11.37、26.92,P均＜0.05),脾指数和胸腺指数明显升高(F分别为10.419、5.859,P均＜0.05).Ty21a、TPIN组小鼠胸腺组织皮质增宽,淋巴细胞增多,有轻度炎性反应;脾脏组织白髓增多,淋巴细胞增多伴随中性粒细胞浸润.结论 TPIN具有良好的免疫保护作用,能明显刺激机体产生体液免疫和细胞免疫,从而对肿瘤可能具有较好的治疗作用.

    白细胞介素-2肝细胞生长因子抑制剂4减毒沙门菌体液免疫细胞免疫脾指数胸腺指数

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