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中国兽医科学
中国农业科学院兰州兽医研究所
中国兽医科学

中国农业科学院兰州兽医研究所

殷宏

月刊

1673-4696

zgsykx@zgsykx.com

0931-8342195

730046

甘肃省兰州盐场堡徐家坪1号

中国兽医科学/Journal Chinese Veterinary ScienceCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>《中国兽医科学》是由农业部主管、中国农业科学院兰州兽医研究所主办的兽医专业学术性期刊。继1999年获首届国家期刊奖、2003年获第二届国家期刊奖百种重点期刊奖之后，2005年又荣获第三届国家期刊奖提名奖。为全国百余种畜牧兽医类期刊中唯一获得国家期刊奖的期刊。 《中国兽医科学》办刊宗旨是：报道国内外兽医科学的研究进展和水平，推广兽医科学研究成果，反映国内外兽医科学研究动态，探讨新的兽医学理论和研究方法。主要栏目有：专家论坛、微生物学、寄生虫学、流行病学、药物学、中兽医学、普通病学、基础兽医学、综述专论、研究简报等。适于兽医科学研究人员、农业院校动物医学、动物科学专业师生阅读，也适合各级畜牧兽医技术人员和各级畜牧兽医行政管理人员参考。热忱欢迎广大兽医科研、教学及其他学科科技工作者踊跃投稿。本刊对所有来稿均采取双盲审稿，即将严格筛选的稿件送有关专家评审，作者不知审稿专家，审稿专家不知作者，以公平、公正地择优录用。经评审录用的文稿本刊力争在最短的时间内刊出。投稿者请登陆本刊网站参阅本刊投稿指南，投稿电子信箱：zgsykx@zgsykx.com。
正式出版
收录年代

    过表达JMJD6基因的293T细胞系的构建及对水疱性口炎病毒增殖效率的评价

    黄梦瑶杨帆杨洋邵文华...
    569-576页
    查看更多>>摘要：为提高水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)在细胞中的增殖效率,本研究利用慢病毒包装系统构建Jumonji C结构域蛋白 6(Jumonji domain-containing protein 6,JMJD6)过表达的HEK-293T/JMJD6 细胞系,分析VSV在HEK-293T/JMJD6 细胞系与HEK-293T细胞中的复制差异.首先以JMJD6 基因为目标,构建重组质粒pLV-puro-3×Flag-JMJD6,并与辅助质粒pMD2.G和psPAX2 共转染至HEK-293T细胞进行慢病毒包装.将包装好的慢病毒感染HEK-293T细胞并通过嘌呤霉素筛选获得过表达JMJD6 基因的阳性细胞.利用Western-blot、间接免疫荧光试验、流式细胞术和蚀斑试验检测VSV在HEK-293T/JMJD6细胞系中的复制能力.结果显示,在HEK-293T/JMJD6 细胞系中,VSV的复制能力显著增强.实时荧光定量检测VSV感染的HEK-293T/JMJD6 细胞系和野生型HEK-293T细胞中干扰素下游基因的表达,结果显示HEK-293T/JMJD6 细胞系抑制VSV诱导的Ⅰ型干扰素下游基因的产生.总之,本研究构建的HEK-293T/JMJD6 细胞系能显著促进VSV的增殖并抑制Ⅰ型干扰素信号通路,为VSV疫苗候选细胞株的筛选奠定了基础.

    JMJD6水疱性口炎病毒慢病毒包装过表达细胞系干扰素

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    宿主OAS2蛋白抑制非洲猪瘟病毒体外复制的研究

    赵思越史喜绢杨行张大俊...
    577-583页
    查看更多>>摘要：为了探究宿主蛋白 2′,5′-寡腺苷酸合成酶 2(OAS2)与非洲猪瘟病毒(ASFV)复制之间的关系,本研究通过蛋白免疫印迹(Western-blot)和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析了ASFV 感染对宿主OAS2的调控作用;构建并合成OAS2 真核表达质粒以及siRNA干扰序列,通过RT-qPCR、Western-blot方法探究在MA-104 细胞中外源过表达OAS2 及在PAMs细胞中下调OAS2 表达对ASFV 体外复制的影响.结果显示,ASFV感染PAMs细胞后,OAS2 的蛋白水平和转录水平皆上调,并且外源过表达OAS2 显著抑制了ASFV的复制,下调OAS2表达促进了ASFV的复制.本研究通过对宿主蛋白OAS2进行过表达和敲低,证实了OAS2可以抑制ASFV体外复制,该结果为进一步研究宿主对ASFV的抗病毒免疫研究提供了理论基础.

    非洲猪瘟病毒OAS2天然免疫抑制

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    禽多瘤病毒VP4蛋白单克隆抗体的制备及其间接免疫荧光检测方法的初步建立

    汪溪翟天舒许冠龙王嘉...
    584-594页
    查看更多>>摘要：为制备禽多瘤病毒(avian polyomavirus,APV)VP4 蛋白单克隆抗体,初步建立APV的间接免疫荧光检测方法,本研究通过原核表达APV VP4 蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,以制备的VP4单克隆抗体为一抗,FITC-山羊抗小鼠IgG为二抗,优化反应条件.结果表明,获得 15株阳性细胞株,经亚型鉴定,其中 2 株单克隆抗体的重链为IgG2b类型,13 株重链为IgG1 类型,轻链均为к型.选择 3 株制备单克隆抗体,这 3 株抗VP4 单克隆抗体浓度分别为 2.9、2.6、3.2 mg/mL;亲和常数分别为 1.06×1010、2.95×109、9.60×109.两株效价均为 1 ∶204 800,另一株的效价为 1 ∶51 200.经Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定,3 株单克隆抗体均能与APV发生特异性反应;本研究建立的间接免疫荧光检测方法的最适条件为:Anti-A-VP4-15 1 ∶1 000 倍稀释,4℃条件下过夜孵育,二抗 1 ∶200 稀释,37℃条件下孵育 1 h.以建立的方法检测细胞中的减蛋综合征病毒(EDSV)、网状内皮组织增生症病毒(REV)、禽白血病病毒(ALV)、新城疫病毒(NDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)和APV,只有APV的检测结果显示阳性,检测其他病毒的结果均为阴性.应用该单克隆抗体建立的间接免疫荧光方法在细胞上能检出至少 5 TCID50 APV感染.本研究制备的单克隆抗体和建立的间接免疫荧光方法为APV感染的流行病学调查和实验室诊断奠定了基础.

    禽多瘤病毒VP4蛋白原核表达单克隆抗体间接免疫荧光试验

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    传染性皮下和造血器官坏死病毒RPA与CRISPR-Cas12a可视化快速检测方法的建立

    周傲白雪徐博文沙才华邵建宏...
    595-601页
    查看更多>>摘要：根据传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)基因序列的保守区域设计并合成多组RPA引物和特异性crRNA,经过筛选与优化,建立RPA-Cas12a系统荧光检测法和试纸条法 2 种可视化快速检测IHHNV的方法.结果显示,这 2 种可视化检测方法在 37℃恒温反应 40 min可检测出IHHNV;与对虾白斑综合征病毒、虾肝肠胞虫和十足目虹彩病毒 1 无交叉反应;该方法灵敏度较高,最低检测浓度为 10 copies/μL;应用该方法对 10 份IHHNV阳性临床样本进行检测,阳性检出率为 100%.综合结果表明,建立的荧光法和试纸条 2 种可视化检测IHHNV的方法操作简单,反应灵敏,适用于对虾养殖场或基层实验室对IHHNV的定期监测和初筛.

    传染性皮下和造血器官坏死病毒重组酶聚合酶扩增CRISPR-Cas12a检测方法

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    犬猫弓形虫病real-time荧光定量PCR检测方法的建立与应用

    施远国胡潇予柯艳坤李颖鑫...
    602-608页
    查看更多>>摘要：为建立一种灵敏性高、特异性强、可自动化检测犬猫弓形虫的分子学诊断方法,本研究提取弓形虫RH虫株DNA,以致密颗粒蛋白 7(GRA7)基因保守区为靶标,设计特异性引物并构建标准质粒pMD18-GRA7,以标准质粒pMD18-GRA7 作为模板,建立SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR(real-time PCR or qPCR)检测方法.结果显示,该方法特异性引物只能扩增出弓形虫DNA样品,对阴性样品及其他犬猫寄生虫阳性样品DNA则未见扩增曲线.所建qPCR方法的检测下限为 3 copies,当标准品浓度为 3 copies/μL时,检测Ct值为29.4.对犬猫临床样品进行检测,并与商品化试剂盒结果相比校,阴阳性符合率达 100%.上述结果表明,本研究建立的SYBR-Green Ⅰ荧光定量PCR方法特异性好,敏感性强,结果稳定,可用于犬猫弓形虫病的临床检测.

    弓形虫犬猫GRA7实时荧光定量PCR

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    H9N2禽流感病毒HA蛋白mRNA疫苗的构建表达及鉴定

    花悦宋奇珊王东东杨思敏...
    609-614页
    查看更多>>摘要：H9N2 亚型禽流感病毒(AIV)是严重危害家禽养殖业的病原,由于目前的疫苗无法应对突发的AIV 疫情,因此本研究设计一种基于血凝素(HA)基因的抗H9N2 亚型禽流感病毒mRNA 疫苗.在原有Puc57 克隆载体基础上,构建mRNA体外转录模板,将PCR得到的HA基因和EGFP基因插入模板中构建重组质粒Puc57-HA和Puc57-EGFP.将重组质粒线性化后,进行体外转录、加帽、加尾、纯化等一系列修饰并转染鸡成纤维细胞(DF-1),观察 48 h荧光表达情况,并用Western-blot检测HA蛋白在细胞中的表达.结果显示,48 h出现绿色荧光,Western-blot显示HA蛋白成功表达.本试验为H9N2 禽流感mRNA疫苗的研制奠定了基础.

    禽流感mRNA疫苗体外转录

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    基于单B细胞抗体技术筛选全犬源犬瘟热病毒H蛋白单克隆抗体

    穆永侯晓璇贺帅杰王小娟...
    615-623页
    查看更多>>摘要：为研究犬瘟热病毒(CDV)血凝素(H)蛋白生物学功能及开发针对H蛋白的诊断试剂和治疗性单克隆抗体(mAb),本研究使用CDV疫苗株免疫犬后,通过流式细胞仪分选免疫犬外周血单个CDV H蛋白特异性记忆B细胞,巢氏PCR扩增抗体可变区基因,将重轻链配对抗体表达质粒共转染哺乳动物细胞,通过间接ELISA方法和IFA对抗体免疫原性进行鉴定.巢氏PCR结果显示,抗体重链效率为 85.4%(82/96),轻链整体扩增效率为 84.4%(81/96),测序分析后共得到 26 个重轻链配对抗体;通过间接ELISA方法共筛选到 4 株mAb与CDV H蛋白具有结合活性.IFA结果显示,这 4 株mAb均能使CDV感染的Vero细胞出现特异性荧光.本研究首次通过单B细胞抗体技术制备了全犬源CDV H蛋白mAb,为后续CDV H蛋白功能研究奠定了基础,同时为其他犬病原体单抗的制备提供了新思路.

    犬瘟热病毒血凝素蛋白单克隆抗体单B细胞抗体技术

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    大熊猫LIF基因的原核表达及其单克隆抗体的制备与鉴定

    刘项宇张梦诗李非平王神飞...
    624-631页
    查看更多>>摘要：为获得大熊猫LIF单克隆抗体,将大熊猫LIF基因编码区 23～203 基因片段添加酶切位点合成后连接到pET30a原核表达载体上,转化BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达、纯化蛋白后作为免疫原,对BALB/c小鼠进行免疫,并按照常规方法制备杂交瘤细胞,应用间接ELISA方法筛选鉴定阳性杂交瘤细胞株.结果显示,成功构建了LIF(23-202)-pET30a重组质粒,获得了高纯度的LIF重组蛋白免疫原,得到 1 株能分泌大熊猫LIF单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌的抗体亚型为IgG2b.Western-blot结果显示,LIF-2 单克隆抗体可特异性识别大熊猫子宫内膜间质细胞、睾丸支持细胞、皮肤细胞、脐带间充质干细胞及骨髓间充质干细胞中的LIF蛋白.上述结果为阐明LIF的定位和组织表达信息,探讨LIF在大熊猫胚胎着床中的作用奠定了重要基础.

    大熊猫LIF单克隆抗体杂交瘤细胞免疫印迹

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    重组犬IFN-α的原核表达及抗病毒活性研究

    李乐琴曹众达李海珠杜吉革...
    632-640页
    查看更多>>摘要：本试验旨在建立犬α干扰素(CaIFN-α)原核表达及纯化方法,并对其抗病毒活性进行研究.通过构建pET-28a/CaIFN-α表达载体,高效表达和纯化rCaIFN-α;采用CCK-8 法在犬肾细胞(MDCK)上测定rCaIFN-α 的细胞毒性,在 MDCK/VSV 系统中测定其抗病毒活性效价;RT-qPCR 检测 rCaIFN-α 作用MDCK细胞后下游ISGs的表达水平;进一步利用TCID50 和间接免疫荧光(IFA)测定rCaIFN-α抗犬副流感病毒(CPIV)和犬瘟热病毒(CDV)的感染能力.电泳和Western-blot结果显示,成功制备原核表达的特异性rCaIFN-α;CCK-8 结果显示重组蛋白无明显细胞毒性,细胞病变抑制法测定抗VSV 病毒活性效价为1.39×107 U/mL;RT-qPCR 显示rCaIFN-α 可显著上调ISG15、Mxl 等ISGs 的转录水平;IFA 等结果显示,rCaIFN-α对CPIV和CDV具有良好的抗病毒作用.结果表明,本试验制备的rCaIFN-α具有优良的抗病毒感染活性,为进一步研发新型宠物抗病毒制剂奠定了基础.

    犬IFN-α原核表达干扰素刺激基因(ISGs)抗病毒活性

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    扬子鳄CXCL8基因的生物信息学分析及表达量测定

    刘聪陶启荣赵晓燕费荣梅...
    641-649页
    查看更多>>摘要：为进一步了解扬子鳄CXCL8 的功能及在痛风症发病过程中的作用,从扬子鳄肝组织中克隆出CXCL8 基因,进行相关生物信息分析、序列比对和进化树绘制;构建原核表达载体表达CXCL8 蛋白,制备并得到小鼠抗扬子鳄CXCL8 多克隆抗体;对不同时期扬子鳄组织中CXCL8 的转录水平进行检测与分析.研究结果表明,扬子鳄CXCL8 基因ORF序列长度为 291 bp,共编码 96 个氨基酸,蛋白分子质量为 10.67 ku.序列比对和进化树结果显示,扬子鳄CXCL8 基因与密西西比鳄的同源性高达 95%,具有很强的亲缘关系,处于同一进化分支.制备得到的多克隆抗体效价高达 1 ∶102 400,免疫原性良好,CXCL8 在肾和小肠组织中呈现高表达,且冬眠末期表达量高于冬眠初期,表达量测定结果与扬子鳄痛风症高发期存在一定的相似性.本研究结果为深入了解扬子鳄CXCL8 基因对痛风症的调控机制奠定了基础,为扬子鳄痛风症的发病机制提供了新见解.

    扬子鳄CXCL8序列分析原核表达多克隆抗体

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