首页期刊导航|中国兽医学报
期刊信息/Journal information
中国兽医学报
中国兽医学报

王哲

月刊

1005-4545

xbcjvs@163.com

0431-87836534

130062

长春市西安大路5333号

中国兽医学报/Journal Chinese Journal of Veterinary ScienceCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>本学报是由解放军军需大学主办的兽医专业学术性期刊，是国内兽医界最有影响的权威性核心期刊之一。被CA、CAB、AGRIS、中国生物学文摘、中国农业文摘及中国科学引文索引等近20种国内外数据库或检索性刊物收录。《中文核心期刊要目总览》列为中国兽医科学核心期刊。中科院医学信息研究所确定其为中国生物医学核心期刊。
正式出版
收录年代

    非洲猪瘟病毒CP312R基因编码蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备与应用

    刘佳晨郭子强陈金霞曹云雷...
    1-6页
    查看更多>>摘要：为制备ASFV CP312R 基因编码蛋白的多克隆抗体,利用PCR方法从非洲猪瘟病毒(African swine fever vi-rus,ASFV)的灭活样品中扩增出924 bp的CP312R基因全长序列,利用同源重组法构建出原核表达质粒pCold-Ⅰ-ASFV-CP312R,将其转化至原核表达感受态细胞BL21中,经1 mmol/L的IPTG低温条件下诱导表达CP312R编码蛋白并经过镍柱亲和层析纯化后,利用SDS-PAGE对重组蛋白进行表达鉴定和反应原性分析,表达蛋白的相对分子质量约为34 kDa,通过 Western blot分析,该蛋白能被ASFV抗体特异性识别.将所得的蛋白经处理纯化后免疫小鼠3次,得到含多克隆抗体的血清.利用该抗体检测实验室构建并拯救的表达ASFV CP312R基因编码蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV),结果显示该多抗具有良好的反应原性和特异性,并且证明了 ASFV CP312R基因编码蛋白可在PRRSV活载体中稳定表达.

    非洲猪瘟病毒CP312R基因原核表达多克隆抗体

      原文链接:
    • NETL
    • NSTL
    • 万方数据

    检测非洲猪瘟病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法的建立

    林彦星翁巧玉吴江黄超华...
    7-11页
    查看更多>>摘要：利用非洲猪瘟病毒(ASFV)p72蛋白不同抗原表位的2株单克隆抗体,1株作为捕获抗体,另1株用辣根过氧化物酶(HRP)标记后作为检测抗体,采用方阵法对ELISA反应条件进行优化,建立了检测ASFV抗原的双抗体夹心ELISA方法.结果显示,该方法中捕获抗体包被质量浓度为1.25 mg/L,酶标单克隆抗体的最适稀释度为1:4 000.通过试验确定该方法的临界值为0.299,当样品D450值≥0.3,且P/N大于2时,判定为阳性.该双单抗夹心ELISA方法可特异性检测ASFV抗原,其他抗原检测结果均为阴性,特异性强;重复性好,批内和批间变异系数(CV)均小于8％.应用本研究建立的方法与荧光PCR方法同时对225份临床样品进行检测,总符合率为96.89％.结果表明,本研究建立的双抗体夹心ELISA方法可用于ASFV抗原的大量样品检测,为ASF防控提供了技术支持.

    ASFV单克隆抗体双抗体夹心ELISA

      原文链接:
    • NETL
    • NSTL
    • 万方数据

    非洲猪瘟病毒p30蛋白在本氏烟草中的表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立

    刘悦魏天张春雨张建峰...
    12-19,28页
    查看更多>>摘要：为建立一种非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗体间接ELISA检测方法,利用马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)介导的植物生物反应器在本氏烟草中表达ASFV p30蛋白,并以表达的蛋白作为包被抗原,对间接ELISA各反应条件进行优化.依据ASFV SY-18株的CP204L(p30)基因序列,按照本氏烟草密码子的偏好性,对p30基因(231～536 bp)的核苷酸序列进行优化、人工合成及克隆,通过In-Fusion连接技术将扩增的p30基因插入到PVY基因组的P1和HC-Pro基因之间,构建PVY-p30重组病毒质粒,以摩擦的方式将质粒接种本氏烟草叶片,14 d后,通过RT-PCR和Western blot分析目的基因的转录和重组蛋白的表达情况,并利用Ni-NTA-琼脂糖亲和层析柱纯化本氏烟草中表达的p30重组蛋白,Western blot分析p30重组蛋白的纯化效果和反应原性,将纯化后的p30重组蛋白作为包被抗原,建立ASFV抗体间接ELISA检测方法.结果显示,构建的PVY-p30重组病毒能够系统性侵染本氏烟草;p30重组蛋白能够在本氏烟草叶片中表达,且具有良好的反应原性;纯化的p30重组蛋白效果较好,能够被p30蛋白单克隆抗体识别.建立的ELISA检测方法最佳反应条件为抗原质量浓度0.5 mg/L,37 ℃包被1 h;待检血清1∶400倍稀释,37 ℃孵育0.5 h;HRP标记二抗37 ℃孵育0.5 h;TMB室温避光显色10 min;阴阳性临界值为0.461.当ASFV阳性血清稀释度为1∶2 560时,仍检测为阳性,具有较高的敏感性;该方法与其他常见病阳性血清不发生交叉反应,能够特异性地检测ASFV抗体;重复性试验显示批内变异系数小于5％,批间变异系数小于10％;该方法与ASFV商品化检测试剂盒相比,总体符合率为85.0％.结果表明,本研究构建的PVY-p30重组病毒载体能介导p30重组蛋白在本氏烟草中表达,以植物表达的p30重组蛋白为抗原建立的ASFV抗体间接ELISA检测方法可用于疾病的临床检测及疫情监测,同时为可饲疫苗的研发提供了基础材料.

    间接ELISA非洲猪瘟病毒马铃薯Y病毒植物生物反应器p30蛋白

      原文链接:
    • NETL
    • NSTL
    • 万方数据

    猪圆环病毒2型Cap蛋白互作宿主核蛋白的筛选与鉴定

    余涛胡婧宇司维颜焰...
    20-28页
    查看更多>>摘要：为探究在猪圆环病毒2型(PCV2)入核复制过程中发挥生物学功能的宿主核相关蛋白,本研究借助免疫沉淀技术联合蛋白质谱鉴定技术,从宿主细胞核膜提取物中筛选到了可与PCV2 Cap蛋白发生潜在互作的2个蛋白质:高迁移率族蛋白1(HMGB1)和精氨酸酶1(ARG1).通过进一步的免疫共沉淀试验及激光共聚焦试验,证明了HMGB1、ARG1与PCV2 Cap蛋白的相互作用,且互作与Cap蛋白的核定位信号(NLS)无关.该研究为进一步探索PCV2入核复制的机制解析提供了重要信息.

    猪圆环病毒2型入核Cap蛋白互作高迁移率族蛋白1精氨酸酶1

      原文链接:
    • NETL
    • NSTL
    • 万方数据

    猪丁型冠状病毒ns7、ns7a蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

    杨宛书李娟杜柳阳陈文镜...
    29-38页
    查看更多>>摘要：为获得免疫原性好的猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)辅助蛋白ns7和ns7a,并制备特异性的多克隆抗体,以用于ns7和ns7a蛋白功能的初步研究,本试验构建原核表达载体pGEX-PDCoV-ns7和pGEX-PD-CoV-ns7a,测序正确后转入E.coli BL21(DE3)中诱导表达.利用GST-Resin进行蛋白纯化,将获得的重组蛋白以皮下注射方式免疫BALB/c小鼠,成功制备4份PDCoV ns7和2份ns7a小鼠多克隆抗体,并用ELISA、Western blot和IFA对抗体效价、反应性及特异性进行鉴定.结果显示,本试验成功应用大肠杆菌表达了可溶性ns7和ns7a蛋白,制备的PDCoV ns7和ns7a多克隆抗体效价分别为1∶409 600和1∶12 800,并在 Western blot和IFA试验中具有良好的反应性及特异性.结果表明,制备的PDCoV辅助蛋白ns7和ns7a多克隆抗体为深入研究ns7及ns7a蛋白的生物学功能提供了重要工具.

    猪丁型冠状病毒辅助蛋白ns7和ns7a原核表达多克隆抗体

      原文链接:
    • NETL
    • NSTL
    • 万方数据

    BVDV、IBRV和AKAV多重PCR检测方法的建立与应用

    鲍显伟李昊李小龙石亚楠...
    39-43,87页
    查看更多>>摘要：牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotrache-itis virus,IBRV)和阿卡斑病毒(Akabane virus,AKAV)是引起牛发生繁殖障碍性传染病的主要病原.本研究根据BVDV的5'-UTR、IBRV的gB基因和 AKAV的S基因设计了 3对特异性引物,构建了检测BVDV、IBRV和AKAV的多重PCR方法,并优化反应体系和条件,验证了该方法的特异性和敏感性.结果显示,构建的多重PCR方法对其他牛源病毒无扩增,对BVDV、IBRV和AKAV的最低检测限分别为103、103和104拷贝/μL.对采集的184份临床血清样品进行检测,BVDV、IBRV和AKAV的阳性率分别为18.48％、14.13％和1.63％,BVDV和IBRV 2种病原混合感染的阳性率为3.8％,BVDV和AKAV两种病原混合感染的阳性率为1.63％.该结果与我国出入境检疫行业标准符合率达92％以上,BVDV+IBRV和BVDV+AKAV混合感染的符合率为100％.表明本研究建立的多重PCR检测方法可用于临床样品的检测.BVDV、IBRV和AKAV多重PCR检测方法的建立,为我国牛群BVD、IBR和AKA的检测和流行病学调查提供了一种快捷简便的分子生物学检测方法.

    牛病毒性腹泻病毒牛传染性鼻气管炎病毒阿卡斑病毒多重PCR

      原文链接:
    • NETL
    • NSTL
    • 万方数据

    1株B基因型牛副流感3型病毒的分离鉴定及全基因组序列分析

    张倩王旭韩猛立张星星...
    44-51页
    查看更多>>摘要：为探究新疆某集约化牛场1～6月龄犊牛群中牛副流感病毒3型(BPIV3)的感染情况,对采集的60份犊牛鼻拭子样品进行RT-PCR检测、病毒分离鉴定及全基因组测序和遗传进化分析.结果显示,样品中BPIV3核酸阳性率为11.67％.从核酸阳性样品中分离获得1株BPIV3,并命名为XJ21032-1(45),其基因组全长为15 512 bp;遗传进化分析表明,XJ21032-1(45)属于BPIV3 B基因型,该分离株与澳大利亚的BPIV3 B基因型参考株Q5592(EU277658)的同源性最高为93.4％.本研究成功分离得到了 1株B基因型BPIV3,证实B型毒株在我国的存在和流行,为BPIV3疫苗研发提供了原材料,也有助于我国BPIV3分子进化规律及溯源的进一步研究.

    牛副流感病毒3型B基因型分离鉴定全基因组序列分析

      原文链接:
    • NETL
    • NSTL
    • 万方数据

    整合NDV-F基因的重组MDV载体疫苗的构建

    龚乐乐刘盼王乐乐王芮...
    52-58页
    查看更多>>摘要：为了预防马立克氏病毒(Marek's disease virus,MDV)和新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)混合感染给养禽业造成的危害,本研究以细菌人工染色体(BAC)为基因编辑平台,利用Red同源重组技术,将NDV的F基因整合到MDV双基因缺失毒株Md5 BACΔmeqΔLorf9基因组中,诱导Ⅰ-Sce Ⅰ酶表达,将筛选标记卡那霉素抗性基因敲除,构建重组活载体疫苗候选毒株 Md5 BACΔmeqΔLorf9-F.PCR以及限制性片段多态性(RFLP)分析结果显示F基因成功整合到MDV基因组且重组质粒基因组完整;将鉴定正确的重组质粒转染鸡胚成纤维细胞,1周后出现明显的细胞病变,且噬斑大小与亲本毒无明显差异;体外生长曲线结果显示,F基因的插入不影响病毒的体外复制能力.结果表明,本研究正确构建了表达NDV保护性抗原F基因的重组MDV,为研制ND重组MDV活载体疫苗奠定了基础,对NDV和MDV混合感染的防控具有重要意义.

    细菌人工染色体马立克氏病病毒新城疫病毒活载体疫苗

      原文链接:
    • NETL
    • NSTL
    • 万方数据

    基因Ⅱ型鹅星状病毒ORF2蛋白原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定

    吕志航廉春杨姚鑫炎张玉倩...
    59-65页
    查看更多>>摘要：旨在利用原核表达系统表达基因Ⅱ型鹅星状病毒(goose astrovirus,GoAstV)ORF2蛋白,制备兔源多克隆抗体,并对制备的多抗进行效价检测及鉴定.根据GoAstV-GDZJ37株ORF2基因序列设计特异性表达引物,利用RT-PCR方法进行目的基因扩增,将其连接至原核表达载体pET-32a(+);经酶切鉴定和测序正确后,转化至表达感受态细胞,并进行诱导表达及SDS-PAGE分析.以无His标签的ORF2蛋白作为免疫原免疫新西兰大白兔,制备兔源多克隆抗体.将含His标签的ORF2蛋白经Ni-NTA亲和层析法进行纯化,并以纯化后的蛋白作为检测原,通过I-ELISA方法检测兔源多克隆抗体的效价,并通过 Western blot及IFA检测方法鉴定其特异性.结果显示,克隆获得GoAstV-GDZJ37株ORF2基因,并利用原核表达系统分别表达2种重组蛋白,大小分别为77、95 kDa,且均为不可溶性表达.I-ELISA结果显示,多克隆抗体的效价为1:102 400,表明无His标签的ORF2蛋白具有良好的免疫原性;Western blot及IFA结果显示,多克隆抗体可与含His标签的ORF2蛋白及GoAstV毒株均能发生特异性反应,表明制备的多抗具有良好的反应性.本试验成功建立GoAstV ORF2蛋白原核表达系统,并制备高效价兔源多克隆抗体,为后续GoAstV血清学诊断及GoAstV致病机制的深入研究提供了依据.

    基因Ⅱ型鹅星状病毒ORF2蛋白原核表达多克隆抗体

      原文链接:
    • NETL
    • NSTL
    • 万方数据

    禽腺病毒DAdV-3和FAdV-4双重荧光定量PCR检测方法的建立及应用

    周珈羽朱春华陈珍程龙飞...
    66-73页
    查看更多>>摘要：禽腺病毒属成员鸭腺病毒3型(duck adenovirus type 3,DAdV-3)和禽腺病毒4型(fowl adenovirus serotype-4,FAdV-4)是养殖场主要流行的病原,对养禽业造成巨大的经济损失.目前尚未见可同时快速检测这2种病原的双重荧光定量PCR检测方法,本研究基于DAdV-3 GDMM10毒株和FAdV-4 GDMZ毒株Fiber2基因序列比对及遗传进化分析,分别在Fiber2基因保守区设计特异性引物,建立了能同时鉴别临床上常见的DAdV-3和FAdV-4双重荧光定量PCR检测方法.结果表明,DAdV-3 GDMM10和FAdV-4 GDMZ Fiber2基因处于两个不同进化分支上,同源性为46.10％.建立的检测DAdV-3和FAdV-4双重荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高,最低可检出45拷贝/μL的DAdV-3样品和17拷贝/μL的FAdV-4样品;且检测结果可直接通过Tm值差异进行判定,简化操作时间.利用该双重荧光定量PCR方法对2022年度临床上采集的34份肝炎-心包积液疑似样品进行检测,DAdV-3和FAdV-4检出率分别为17.65％和2.94％.为进一步开展禽源DAdV-3和FAdV-4的分子流行病学及共感染致病机制奠定了基础.

    鸭腺病毒3型禽腺病毒4型Fiber2基因实时定量PCR临床检测

      原文链接:
    • NETL
    • NSTL
    • 万方数据