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中国兽医学报
中国兽医学报

王哲

月刊

1005-4545

xbcjvs@163.com

0431-87836534

130062

长春市西安大路5333号

中国兽医学报/Journal Chinese Journal of Veterinary ScienceCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>本学报是由解放军军需大学主办的兽医专业学术性期刊，是国内兽医界最有影响的权威性核心期刊之一。被CA、CAB、AGRIS、中国生物学文摘、中国农业文摘及中国科学引文索引等近20种国内外数据库或检索性刊物收录。《中文核心期刊要目总览》列为中国兽医科学核心期刊。中科院医学信息研究所确定其为中国生物医学核心期刊。
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    Ⅱ型登革病毒重组亚单位候选疫苗构建及免疫原性分析

    王龙龙于宁李霄张赫...
    2386-2392页
    查看更多>>摘要：登革病毒(dengue virus,DENV)引发的疾病严重威胁着人类的生命健康,我国尚无对应的有效疫苗,本研究拟制备出1种针对Ⅱ型DENV的重组亚单位候选疫苗.以Ⅱ型DENV EDⅢ基因为目的基因,构建重组真核表达质粒并转染至悬浮细胞中表达目的蛋白,筛选合适的免疫剂量来免疫小鼠,进行免疫原性分析.成功构建出DENV重组真核表达载体,转染至HEK-293F表达目的蛋白,大小约为15 kDa.以铝盐为佐剂与不同剂量的重组蛋白混合免疫小鼠,分析免疫原性,首次免疫后第35天时,3个蛋白免疫组小鼠血清中特异性抗体水平明显高于佐剂组和PBS组,10 μg D2EDⅢ蛋白组和20 μg D2EDⅢ蛋白组特异性抗体水平分别是5μgD2EDⅢ蛋白组的1.43和1.56倍,抗体分型偏向于IgG1,表明本研究制备的Ⅱ型DENV重组亚单位候选疫苗主要提高体液免疫应答,但3个蛋白免疫组之间IgG1抗体水平差异并不显著.综合免疫效果及疫苗成本,每只小鼠最佳目的蛋白免疫剂量确定为10 μg.本研究制备了 1种Ⅱ型DENV重组亚单位候选疫苗,为DENV的预防提供参考.

    登革病毒重组亚单位候选疫苗免疫原性

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    稳定表达狂犬病病毒糖蛋白293T细胞系的构建及免疫原性研究

    汪芋张守峰于婷婷米立娟...
    2393-2399页
    查看更多>>摘要：为得到可用于狂犬病亚单位疫苗生产的高效表达狂犬病病毒(rabies virus,RABV)糖蛋白的细胞系,本研究以RT-PCR扩增获得RABV糖蛋白基因序列并克隆入慢病毒表达载体中.重组质粒pLV-RVG与包膜质粒pMD2.0G及包装质粒psPAX2共转染HEK-293T细胞,收获慢病毒并感染新的HEK-293T细胞,通过嘌呤霉素加压筛选获得293T-RVG细胞系.将此细胞系传代20代,间接免疫荧光法(IFA)及 Western blot鉴定表明67 kDa的RABV-G蛋白在该细胞内能够高效表达;且细胞系冻融物293T-RVG辅以佐剂肌肉注射免疫小鼠,血清以FAVN法测定RABV中和抗体,在免疫14 d体内效价就可达到2.19 IU/mL,高于国际公认保护阈值(0.5 IU/mL).本研究成功构建了稳定且高效表达RABV糖蛋白的细胞系293T-RVG,该细胞系能够对攻毒小鼠产生保护作用,可作为一种亚单位疫苗,具备用于大规模生产和应用潜能.

    狂犬病狂犬病病毒糖蛋白慢病毒细胞系免疫试验亚单位疫苗

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    肺炎克雷伯菌噬菌体vB_KpnP_71Y的生物学特性及基因组分析

    姜姗杉赵日虹邱操冀亚路...
    2400-2408页
    查看更多>>摘要：肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)是重要的人畜共患病原菌,可以引起多种局部和全身性感染.目前,肺炎克雷伯菌耐药问题严重,多重耐药菌株不断出现,甚至耐药性高毒力肺炎克雷伯菌感染的发生率也逐年升高.本试验以肺炎克雷伯菌临床分离株71Y为出发菌株,在污水样品中成功获得了具有强裂解活性的噬菌体,该噬菌体被命名为vB_KpnP_71Y(简称P71Y),进一步对P71Y的一般生物学特性和基因组进行了研究和分析.P71Y可在宿主菌菌苔上形成2～5 mm的透亮噬斑,噬斑周围有半透明晕环;电镜观察显示P71Y是有尾噬菌体目、短尾噬菌体科的成员;P71Y感染肺炎克雷菌71Y的潜伏期约3 min,一个感染周期约持续50 min,每感染一个细菌约可产生58个子代噬菌体病毒颗粒;裂解谱显示该噬菌体可裂解K20与K57荚膜血清型的肺炎克雷伯菌;该噬菌体在4～50 ℃、pH值3～12的条件下稳定性良好;基因组分析表明,P71Y基因组为双链DNA,全长39 700 bp,G+C含量53％,共有53个编码基因,P71Y不携带毒力因子和耐药基因,显示出遗传的安全性.本研究分离出1株可裂解多种血清型肺炎克雷伯菌的新型裂解性噬菌体,为研究噬菌体与不同血清型肺炎克雷伯菌的相互作用以及利用噬菌体预防和治疗多重耐药肺炎克雷伯菌感染提供试验材料.

    肺炎克雷伯菌人畜共患病原菌噬菌体感染防控

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    日本脑炎病毒(JEV)感染睾丸间质细胞对TLRs信号通路的影响及其调控炎症因子的分泌

    何松晏仁潭汤德元曾智勇...
    2409-2417页
    查看更多>>摘要：为了探究日本脑炎病毒(JEV)在感染睾丸间质细胞过程中对TLRs信号通路的影响及其调控炎症因子的分泌情况,本研究以1 MOI剂量的JEV接种睾丸间质细胞后,使用qPCR方法检测不同时间段TLR3、TLR7、TLR8、TRIF和 MyD88基因的mRNA水平,Western blot方法检测JEV感染睾丸间质细胞6 h时TLR3、TLR7、TRIF和MyD88蛋白表达水平,ELISA检测不同时间段(6、12、24 h)IL-1β、IL-6和TNF-α的表达情况.结果显示:JEV感染睾丸间质细胞6 h后显著上调TLR3、TLR7、TRIF和 MyD88基因mRNA水平(P＜0.05),下调TLR8基因mRNA水平(P＜0.05);Western blot结果显示,JEV感染睾丸间质细胞6 h时TLR3、TLR7、TRIF和MyD88蛋白表达均显著上调(P＜0.05),与相应mRNA转录水平结果一致;TLR8蛋白表达变化不显著.ELISA检测结果显示,JEV感染睾丸间质细胞6 h后IL-6极显著增加(P＜0.01),IL-1β和TNF-α表达无显著变化.利用siRNA分别对TLR3、TLR7、TLR8、TRIF和MyD88进行基因沉默,对沉默后的细胞接种JEV 6 h时取上清液ELISA检测IL-6表达水平.结果显示,沉默TLR3、TLR7、TLR8、TRIF和 MyD88后均可显著减轻JEV感染引起的IL-6分泌增加(p＜0.05),表明JEV感染睾丸间质细胞后可通过激活TLR3、TLR7和TLR8信号通路诱导炎症因子IL-6的表达.本研究为深入阐明JEV感染导致的繁殖障碍机制提供了参考.

    日本脑炎病毒睾丸间质细胞Toll样受体炎症因子

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    肠炎沙门菌eutR基因缺失株的构建及其部分生物学特性的鉴定

    赵桂新段文龙王凤杰张晓禹...
    2418-2423页
    查看更多>>摘要：利用同源重组的方法成功构建了肠炎沙门菌eutR基因缺失株,通过对其生化特性、运动性、抵御体外应激作用以及在RAW264.7细胞内存活能力等方面进行研究.结果显示,肠炎沙门菌eutR基因缺失株生化特性和运动能力较肠炎沙门菌野生型没有明显变化;肠炎沙门菌eutR基因缺失株抵御酸、碱和抗氧化能力显著降低,而抵御热的能力无显著变化;eutR基因缺失株在RAW264.7细胞内存活能力较野生型显著降低.为了进一步分析eutR基因对肠炎沙门菌毒力因子表达的影响,利用SYBR Green法检测缺失株与野生株invH、ssav、ssrA、xthA、orf245、sodC、lrp、mrr1和hflk等毒力基因的相对表达水平,研究发现肠炎沙门菌eutR基因缺失株的上述毒力因子的表达较野生株均显著下调.经动物试验对肠炎沙门菌eutR基因缺失株进行LD50测定,结果显示eutR基因缺失株的LD50高于野生型,表明eutR基因可影响沙门菌的毒力.本研究阐明了 eutR基因对肠炎沙门菌在巨噬细胞内存活能力、部分生物学特性及毒力的影响,为肠炎沙门菌基因工程减毒疫苗开发提供新的基因敲除靶标.

    肠炎沙门菌eutR基因生物学特性毒力因子

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    基于MaxEnt模型的新疆地区草原革蜱适生区分布预测及其生活周期

    刘燕师光鑫何文文伍军...
    2424-2434页
    查看更多>>摘要：为预测草原革蜱在新疆地区的分布点和适生区情况及了解其实验室条件下生活周期史,本研究使用最大熵(maximum entropy modeling,MaxEnt)模型对草原革蜱在新疆地区的地理分布以及适应区进行预测,并使用刀切法(jackknife test)及环境变量响应曲线评估影响草原革蜱分布的环境因子.根据预测的地点随机采集革蜱样本,利用形态学特征及分子生物学相结合方法鉴定革蜱种类.以新西兰大白兔为唯一供血动物,在实验室自然光照条件下采用耳套饲养法进行人工饲养,观察记录该蜱的生活史周期及生物学特性.使用刀切法检验及SPSS分析结果显示,影响草原革蜱适生区分布的主要环境变量因子为平均温度(Bio1)、均气温日较差(Bio2)、温度季节性变化(Bio4)、最干旱月降水量(Bio14)、降水量变异系数(Bio15)、最冷季度降水量(Bio19).主要环境变量因子响应曲线结果显示,草原革蜱在Bio1为15.58 ℃、Bio2为6.19 ℃、Bio4的变异系数为1 500、Bio14为20 mm、Bio15的变异系数为23.799、Bio19为69 mm时存在概率最大.适生区预测结果显示,新疆草原革蜱适生区为准噶尔盆地、天山山脉及山间谷地、阿尔泰山、吐鲁番盆地、以及天山山脉以南部分地区,占新疆总面积的50.99％.根据MaxEnt模型预测地区采集革蜱,通过形态学结合分子生物学方法鉴定为草原革蜱;幼蜱饱血期为5.31 d,蜕化期为8.19 d,蜕化率达到95.5％;若蜱饱血期为8.65 d,蜕化期为12.86 d,蜕化率达到98％;成蜱饱血期为6.75 d,饱血雌蜱产卵前期为5.86 d,饱血雌蜱产卵期为12.5 d;蜱卵经25.92 d孵化为幼蜱,孵化率达到90％;草原革蜱在实验室条件下完成一个生活史需62～10 d,平均需86.0 d.所构建的MaxEnt模型具有较高的预测精度和准确性,根据主要环境因子变量分析,降水量和温度是影响草原革蜱的主要环境因子.本试验研究为新疆优势蜱种—草原革蜱的危害评估、建立实验室人工饲养纯种蜱体系及当地蜱传疾病的综合防控奠定了基础.

    草原革蜱MaxEnt环境变量适生区生活周期

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    基于自噬调控探讨解毒通络调肝方对SD大鼠胰岛细胞保护的作用机制

    金美英潘韦韦苏婧王婉霖...
    2435-2444页
    查看更多>>摘要：观察解毒通络调肝方基于自噬调控保护2型糖尿病SD大鼠胰岛细胞的作用机制.8周龄SD雄性大鼠,高脂饲料喂养4周后联合链脲佐菌素40 mg/kg单次腹腔注射诱导2型糖尿病大鼠动物模型,中药组予解毒通络调肝方低剂量(1.5 g·kg-1·d-1)、中剂量(4.5 g·kg-1·d-1)及高剂量(13.5 g·kg-1·d-1),西药组予盐酸二甲双胍(0.15 g·kg-1·d-1).连续灌胃4周,检测各组大鼠空腹血糖、糖化血清蛋白、甘油三酯、胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、游离脂肪,ELISA法检测空腹血清胰岛素并计算胰岛素抵抗指数,进行葡萄糖耐量试验.取SD大鼠胰腺组织,HE染色,免疫组织化学法检测Beclin-1、LC3蛋白的表达,Western blot法检测Beclin-1、LC3、P62蛋白的表达,RT-PCR法检测Beclin-1、LC3RNA的表达.结果显示,解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组均有较好的降糖及降脂效果(P＜0.05,P＜0.01).胰腺组织HE染色显示,结构紊乱,边界不清,排列不规则,胞浆少,胰岛内细胞质染色变浅或呈空泡化现象,在解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组中明显改善.自噬调控方面,运用免疫组织化学法、Western blot法、RT-PCR法检测,解毒通络调肝方及盐酸二甲双胍组对自噬标志蛋白Beclin-1及LC3表达均较模型组显著上升(P＜0.01);降低P62蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01).结果证明,解毒通络调肝方可有效缓解2型糖尿病SD大鼠体质量下降趋势,改善多饮情况,具有较好地改善糖、脂代谢的作用,并且可缓解2型糖尿病SD大鼠胰腺组织病理结构的损害保护胰岛细胞,其作用可能是通过调控自噬水平实现的.

    2型糖尿病解毒通络调肝方自噬胰岛细胞

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    酮病奶牛CD4+T细胞中丝氨酸代谢变化与炎症变化

    王晶晶李铭温佳楠王爽...
    2445-2451页
    查看更多>>摘要：为探究健康和酮病奶牛CD4+T细胞中丝氨酸代谢相关基因的表达及炎症相关基因的表达.首先使用磁珠分选的方法,分离奶牛外周血中CD4+T细胞.其次,使用荧光定量PCR方法检测健康、酮病奶牛CD4+T细胞中丝氨酸代谢相关基因 PHGDH、PAST1、PSPH、SHMT1、SHMT2、SDS、SFXN1 及炎症相关基因 IL-6、IFN-γ、IL-17A、FOXP3、IL-10、TGF-β的表达.与健康奶牛相比,酮病奶牛CD4+T细胞中PHGDH、PAST1和PSPH的转录水平均极显著升高(P＜0.01),SDS的转录水平与翻译水平均显著升高(P＜0.01).而SHMT2的转录水平显著降低(P＜0.05).SFXN1的转录水平与翻译水平均显著降低(P＜0.05).SHMT1的转录水平降低但无显著性.与健康奶牛相比,酮病奶牛CD4+T细胞中IL-6、IFN-γ、IL-17A的转录水平均极显著升高(P＜0.01),IL-10、TGF-β、FOXP3的转录水平均显著降低(P＜0.05).结果表明,酮病奶牛丝氨酸合成过程基因表达升高,丝氨酸分解过程相关基因表达降低,而促炎因子表达升高,抑炎因子表达降低,说明丝氨酸代谢在奶牛体内发生炎症过程中发挥重要作用.

    CD4+T细胞丝氨酸代谢炎症酮病奶牛

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    HMGCR对脂肪肝奶牛肝脏胆汁酸及脂质代谢机制

    高畅鸿王爽田艳范文文...
    2452-2457页
    查看更多>>摘要：为了研究3羟基3甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)对脂肪肝奶牛肝脏胆汁酸(BAs)及脂质代谢机制,本研究通过分离原代犊牛肝细胞并利用高浓度非酯化脂肪酸(NEFA)处理体外构建肝脂蓄积模型,然后加入HMGCR过表达腺病毒(Ad-HMGCR)及过表达腺病毒对照(Ad-GFP).利用试剂盒检测了肝细胞甘油三酯(TAG),脂滴荧光检测脂滴变化,及实时荧光定量PCR检测BAs合成和脂肪酸合成及氧化因子变化.结果显示,与Ad-GFP+NEFA组相比,Ad-HMGCR+NEFA组的TAG含量及脂滴荧光显著减少.实时荧光定量PCR结果显示,Ad-HMGCR+NEFA组肝细胞BAs合成因子CYP7A1、CYP8B1、CYP7B1和CYP27A1,BAs转运因子ABCC2和ABCB11及脂肪酸合成因子ACC1、FAS和SREBP1C显著低于Ad-GFP+NEFA组;Ad-H MGCR+NEFA组调控肝细胞BAs合成因子FXR及脂氧化因子CPT1A的水平高于Ad-GFP+NEFA组.结果表明,HMGCR 过表达可显著减轻脂肪肝奶牛肝脏BAs和脂滴蓄积.

    奶牛脂肪肝胆汁酸胆固醇HMGCR

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    中国荷斯坦奶牛PPP1R15A基因多态性及其与乳品质性状的关联分析

    卢启文郭全恒徐攀攀黄依珊...
    2458-2462页
    查看更多>>摘要：磷酸酶1调节亚基15A(protein phosphatase 1,regulatory subunit 15A,PPP1R15A)基因编码的蛋白质属于在真核细胞中普遍存在的蛋白质磷酸酶,本研究以89头中国荷斯坦奶牛血液基因组DNA为模板,利用PCR扩增技术获得PPP1R15A基因的目的片段,产物送检后发现1个单核苷酸多态性位点(SNP)即E3-250 T＞A位点,使用SPSS 23.0软件对该位点的遗传多态性及其与中国荷斯坦奶牛乳品质特性的关联性进行了统计研究.结果表明,该位点存在3个基因型,分别为AA、AT和TT;且基因型AT个体与TT个体的乳脂率和干物质含量差异极显著(P＜0.01),与其他奶量、蛋白、乳糖、体细胞数、尿素氮和校正奶等乳品质性状差异不显著.本研究筛选的功能性SNPs可以为后续深入研究和鉴定牛PPP1R15A基因因果变异提供理论依据.

    中国荷斯坦牛PPP1R15A基因单核苷酸多态性乳品质性状

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