查看更多>>摘要:目的 从调控中性粒细胞(PMN)凋亡探讨血必净注射液对体外循环(CPB)所致急性肺损伤(ALI)的防治作用.方法 按随机数字表法将 30 只雄性SD大鼠分为假手术组(Sham组)、CPB模型组(CPB组)、血必净预处理组(XBJ组),每组 10 只.CPB组和XBJ组CPB 60 min后停机;Sham组不行CPB.XBJ组CPB前 2h腹腔注射 4 mL/kg血必净注射液;Sham组和CPB组注射等量生理盐水.CPB后 4h,取动脉血进行血气分析,计算呼吸指数(RI);取肺组织测定肺系数(LI)和肺含水率.收集支气管肺泡灌洗液(BALF)获取PMN,检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 3(caspase-3)活性,并用流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测微小RNA-142-3p(miR-142-3p)、FoxO1 mRNA表达;蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测FoxO1 蛋白表达.此外,将HL-60 细胞分为对照寡核苷酸转染组、miR-142-3p模拟物转染组和miR-142-3p拮抗物转染组,转染 48h后双荧光素酶报告基因检测miR-142-3p与FoxO1 结合的活性.结果 与Sham组相比,CPB组大鼠RI、LI及肺含水率显著升高,BALF获取PMN中caspase-3 活性和细胞凋亡率显著降低,miR-142-3p表达下降,FoxO1 蛋白表达增加.与CPB组比较,XBJ组大鼠RI、LI、肺含水率显著降低[RI:0.281±0.066 比 0.379±0.071,LI:4.50±0.26 比 5.71±0.42,肺含水率:(80.31±3.25)%比(84.59±3.41)%,均P<0.01],BALF获取PMN中caspase-3 活性和细胞凋亡率显著升高[caspase-3 活性:0.350±0.021 比 0.210±0.014,凋亡率:(15.490±1.382)%比(8.700±0.701)%,均P<0.01],miR-142-3p表达显著上调(2-ΔΔCt:2.61±0.17 比 0.62±0.05,P<0.01),FoxO1 蛋白表达显著降低[FoxO1/GAPDH(相对表达量):0.81±0.04比1.22±0.06,P<0.01].而3组间FoxO1 mRNA表达差异无统计学意义.生物信息学分析结果表明,miR-142-3p可以结合FoxO1 3'非翻译区(3'UTR).与转染无关对照寡核苷酸序列比较,转染miR-142-3p模拟物可以降低HL-60 细胞FoxO1 蛋白表达[FoxO1/GAPDH(相对表达量):0.48±0.06 比 1.00±0.05,P<0.01],而转染miR-142-3p拮抗物后FoxO1 蛋白表达上升[FoxO1/GAPDH(相对表达量):1.37±0.21 比 1.00±0.05,P<0.05],但转染miR-142-3p模拟物或拮抗物对FoxO1 mRNA表达均无影响.荧光素酶报告基因显示,miR-142-3p可以与FoxO1 3'UTR结合抑制FoxO1 表达.结论 血必净注射液可能通过miR-142-3p/FoxO1 轴促进肺泡PMN凋亡,发挥防治CPB所致ALI的作用.